[发明专利]一种检测四种念珠菌的CAMP引物组及试剂盒和应用

权利要求书

1.一种检测四种念珠菌的CAMP引物组，其特征在于，所述四种念珠菌为白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌，所述CAMP引物组包括以下四组引物组中的一组或两组以上：

检测白色念珠菌的引物组包括三对引物，分别为：CA-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，CA-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；CA-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，CA-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；以及，CA-F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，CA-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

检测光滑念珠菌的引物组包括三对引物，分别为：CG-NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，CG-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；CG-LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，CG-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；以及，CG-F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，CG-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

检测近平滑念珠菌的引物组包括三对引物，分别为：CP-NF：其核苷酸序列如SEQ IDNO.13所示，CP-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；CP-LF：其核苷酸序列如SEQ IDNO.15所示，CP-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；以及，CP-F2：其核苷酸序列如SEQID NO.17所示，CP-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

检测热带念珠菌的引物组包括三对引物，分别为：CT-NF：其核苷酸序列如SEQ IDNO.19所示，CT-NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；CT-LF：其核苷酸序列如SEQ IDNO.21所示，CT-LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；以及，CT-F2：其核苷酸序列如SEQID NO.23所示，CT-R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示。

2.如权利要求1所述的检测四种念珠菌的CAMP引物组，其特征在于：所述CAMP引物组包括同时检测白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌的四组引物组。

3.一种用于检测念珠菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1或2所述的CAMP引物组。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括CAMP反应液和CAMP显色液。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述CAMP反应液包括：Bst聚合酶、CAMP反应缓冲液和超纯水。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述CAMP反应液体系中各组分如下：

CAMP反应液(25μL体系，溶剂为超纯水)：

1～80mM Tris-HCl pH8.8；

1～50mM KCl；

1～50mM(NH₄)₂SO₄；

2～20mM MgSO₄；

0.1～0.5％Triton X-100；

0.2～1M甜菜碱；

1～1.6mM dNTP；

5～10U Bst DNA聚合酶。

7.一种非疾病诊断目的的念珠菌检测方法，包括以下步骤：

1)取核酸、CAMP引物组工作液与CAMP反应液混合，制得扩增反应液；

2)取制得的扩增反应液，60～65℃反应20～80min，根据显色结果判断样品是否含有白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌这四种念珠菌的任意一种或以上。