[发明专利]一种检测四种念珠菌的CAMP引物组及试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种检测四种念珠菌的CAMP引物组及试剂盒和应用。所述CAMP引物组包括以下四组引物组中的一组或两组以上：针对白色念珠菌(Candida albicans，CA)的引物组、针对光滑念珠菌(Candida glabrata，CG)的引物组、针对近平滑念珠菌(Candida parapsilosis，CP)的引物组、针对热带念珠菌(Candida tropicalis，CT)的引物组。本发明基于CAMP技术，针对每种常见念珠菌的特异保守区域分别设计6条引物，包括序列主引物(NF/NR)、外引物(F2/R2)、内引物(LF/LR)。本发明提供的引物组敏感性高、特异性强，由其制成的试剂盒能够快速、准确的检测到待测样品中念珠菌的存在。本发明的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利，将其制备成为试剂盒可实现对念珠菌快速准确的检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测四种念珠菌的CAMP引物组及试剂盒和应用。

背景技术

近年来，随着广谱抗生素、激素的滥用问题日益严重，各种介入性治疗的普遍开展，导致真菌感染特别是以念珠菌为代表引起的深部感染发病率在院内逐年增高。由于真菌感染的复杂性，已使之成为导致院内感染死亡的重要原因。

念珠菌是真菌中最为常见的条件致病菌之一，常寄生于人的皮肤、口腔、胃肠道、肛门和阴道粘膜等位置。已知的常见致病型念珠菌有白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克鲁斯念珠菌、星状念珠菌等八种念珠菌，其中以白色念珠菌感染最为常见，可占全部念珠菌感染中的70％以上。当机体免疫机能下降时，容易引起念珠菌感染。

不同念珠菌种对抗生素的耐药性不同，若不区分菌种而采用统一的治疗方案容易对机体产生不同的影响。目前应用于临床的念珠菌检测方法包括三大类：形态学检测法、血清学检测法和分子生物学检测法。形态学检测法需要将该真菌培养一周甚至数周，通过形态观察来判断。此种方法对研究人员技术经验要求较高，且极大程度上限制了病情的早期治疗，易贻误最佳治疗时机；血清学检测法一般通过抗原和抗体检测，但念珠菌的抗原成分复杂，易产生假阳性结果。念珠菌感染患者多伴有免疫抑制，机体产生抗体需要一定反应时间，且抗体反应低下，可能导致假阴性结果。分子生物学的发展为深部真菌感染的早期诊断提供了条件，传统的聚合酶链反应(PCR)等分子技术具有高度的敏感性和特异性，显示出巨大的诊断潜力。但常规PCR检测法中包括了耗时的DNA提取实验，要求使用凝胶电泳或其他缓慢的扩增子检测步骤，这些步骤都会造成假阳性结果的风险，同时对操作人员的专业技术能力要求较高，且PCR仪价格昂贵，扩增时间长。因此，发明一种快速高效、操作简易、安全可靠且适用于现场操作的念珠菌检测试剂盒极为必要。

基于竞争性互补配对的核酸恒温扩增技术(Competitive annealing mediatedamplification of nucleic acids，CAMP)是替代环介导等温扩增(LAMP)的核酸等温扩增方法(见CN107446919A)。该方法主要利用2至6种不同的特异性引物识别靶基因的特定区域，在等温条件进行扩增反应。与常规基因检测手段(如PCR等)相比，CAMP反应在恒温水浴箱便可完成，仪器设备要求低，较传统PCR和培养法操作简单许多，不需要专业人士也可准确完成，适合基层医疗机构及地方检验检疫部门的应用。并且，CAMP还可以大大缩短操作时间，减少样品污染机会，适合应用于念珠菌的快速检测。

发明内容

本发明的目的是，提供一种检测四种念珠菌的CAMP引物组及试剂盒和应用。旨在解决现有技术中检测方法复杂、成本高的技术问题。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

一种检测四种念珠菌的CAMP引物组，所述四种念珠菌为白色念珠菌(Candidaalbicans，CA)、光滑念珠菌(Candida glabrata，CG)、近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis，CP)和热带念珠菌(Candida tropicalis，CT)，所述CAMP引物组包括以下四组引物组中的一组或两组以上：