[发明专利]黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法

权利要求书

1.黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，其特征在于：通过HPLC-UV法测定黑骨藤乙酸乙酯部位咖啡酰基奎宁酸类成分含量结合聚类分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析综合评价黑骨藤药材质量。

2.根据权利要求1所述的黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，其特征在于：所述HPLC-UV法的色谱条件为：

Xtimate C₁₈ 4.6mm×250mm,5μm色谱柱；流动相为0.1％甲酸水溶液A-乙腈B；梯度洗脱，洗脱程序为：0～16min，8％～9％B；16～21min，9％～11％B；21～25min，11％～13％B；25～60min，13％～16％B；60～85min，16％～16％B；85～90min，16％～17％B；90～98min，17％～20％B；98～104min，20％～21％B；104～115min，21％～22％B；进样量10μL；流速1mL/min；柱温25℃；检测波长327nm；

混合对照品溶液的制备：

分别精密称取新绿原酸，绿原酸，隐绿原酸，异绿原酸B，异绿原酸A和异绿原酸C对照品5.02、5.00、5.02、5.03、5.04、5.01mg，置于5mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，配制成相应浓度单一对照品储备液；再精密吸取各对照品储备液适量，加甲醇配制成质量浓度分别为0.02、0.10、0.02、0.02、0.02、0.10mg/mL的混合对照品溶液；

供试品溶液的制备：

精密称取药材样品粉末14.0-18.0g，按料液比1:23-27加入65-75％乙醇溶液350-450mL，加热回流提取2-4次，每次0.8-1.2h，合并提取液，于65-75℃水浴蒸干，加350-450mL水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得黑骨藤乙酸乙酯部位，精密称定黑骨藤乙酸乙酯部位粉末23-27mg至10mL容量瓶，加甲醇2mL，超声处理1-3min，放冷，加甲醇定容至刻度、摇匀，经0.20-0.24μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

3.根据权利要求2所述的黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，其特征在于：所述供试品溶液的制备：精密称取药材样品粉末16.0g，按料液比1:25加入70％乙醇溶液400mL，加热回流提取3次，每次1h，合并提取液，于70℃水浴蒸干，加400mL水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取3次，将3次乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩，水浴蒸干，真空干燥，研磨至粉末状，得HGT-C部位，精密称定HGT-C部位粉末25mg至10mL容量瓶，加甲醇2mL，超声处理2min，放冷，加甲醇定容至刻度、摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，其特征在于：所述咖啡酰基奎宁酸类包括有新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B，异绿原酸A和异绿原酸C。

5.根据权利要求1所述的黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，其特征在于：所述聚类分析是以咖啡酰基奎宁酸类成分含量为变量，运用SPSS24.0统计软件，采用组间平均数联结法，以平方欧氏距离作为样品相似度的距离公式，对黑骨藤药材样品进行聚类分析。

6.根据权利要求1所述的黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，其特征在于：所述主成分分析及偏最小二乘判别分析是采用多元变量统计软件SIMCA14.1得到黑骨藤的PLS-DA得分图、3D图及VIP图。