[发明专利]黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法

说明书

本发明公开了黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法。通过HPLC‑UV法测定黑骨藤乙酸乙酯部位咖啡酰基奎宁酸类成分含量结合聚类分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析综合评价黑骨藤药材质量。本发明具有通过对6种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定结合化学计量法，可以进一步针对黑骨藤抗类风湿性关节炎的功效品质进行评价，为黑骨藤质量控制提供参考依据，本发明所述方法稳定性好，重复性良好，准确度高，对黑骨藤化学成分分离效果好，色谱峰分离较好，响应值较高信息较完全的有益效果。

技术领域

本发明涉及一种含量测定及聚类分析方法，特别是黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法。

背景技术

黑骨藤是萝藦科(Asclepiadaceae)杠柳属(Periploca)植物黑龙骨(Periplocaforrestii Schltr.)的干燥根或全株，是贵州省少数民族用药，收载于《中华本草》(苗药卷)。味苦、辛，具有祛风除湿，活血消痈之功效，用于风湿关节痛，跌扑损伤，月经不调。前期文献调研表明，黑骨藤具有抗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)、强心、抗肿瘤及免疫抑制等作用，其主要含有的化学成分类型主要为醌类，黄酮类，苯丙素类，萜类和C21甾体类等。本课题组前期研究发现，黑骨藤乙酸乙酯部位有良好的体内抗RA活性，为黑骨藤抗RA有效部位。研究表明，黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分具有较好的抗RA活性。而黑骨藤质量控制方法目前主要依据《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)，但在该标准中对黑骨藤的检测仅限于性状、显微及部分理化鉴别试验，不能很好的控制黑骨藤的药材质量。将这些功效成分作为黑骨藤抗RA有效部位含量测定的指标性成分，同时结合化学计量学方法，用于黑骨藤抗RA功效的质量评价鲜报道。

因此，本发明通过HPLC-UV法测定黑骨藤乙酸乙酯部位6种咖啡酰基奎宁酸类成分含量结合聚类分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析综合评价黑骨藤药材质量，对于指导黑骨藤药材合理采收、产地加工、资源开发具有更重要意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法。本发明具有通过对6种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定结合化学计量法，可以进一步针对黑骨藤抗类风湿性关节炎的功效品质进行评价，为黑骨藤质量控制提供参考依据，本发明所述方法稳定性好，重复性良好，准确度高，对黑骨藤化学成分分离效果好，色谱峰分离较好，响应值较高信息较完全的特点。

本发明的技术方案：黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法，通过HPLC-UV法测定黑骨藤乙酸乙酯部位咖啡酰基奎宁酸类成分含量结合聚类分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析综合评价黑骨藤药材质量。

前述的黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定及聚类分析方法中，所述HPLC-UV法的色谱条件为：

Xtimate C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱；流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)；梯度洗脱，洗脱程序为：0～16min，8％～9％B；16～21min，9％～11％B；21～25min，11％～13％B；25～60min，13％～16％B；60～85min，16％～16％B；85～90min，16％～17％B；90～98min，17％～20％B；98～104min，20％～21％B；104～115min，21％～22％B；进样量10μL；流速1mL/min；柱温25℃；检测波长327nm；

混合对照品溶液的制备：

分别精密称取新绿原酸，绿原酸，隐绿原酸，异绿原酸B，异绿原酸A和异绿原酸C对照品5.02、5.00、5.02、5.03、5.04、5.01mg，置于5mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，配制成相应浓度单一对照品储备液；再精密吸取各对照品储备液适量，加甲醇配制成质量浓度分别为0.02、0.10、0.02、0.02、0.02、0.10mg/mL的混合对照品溶液；

供试品溶液的制备：