[发明专利]Reg3β/ HMGB1环路调控EAM小鼠巨噬细胞再编程的实验方法

说明书

本发明提供一种Reg3β/HMGB1环路调控EAM小鼠巨噬细胞再编程的实验方法，包括如下步骤：（1）体外研究Reg3β对EAM小鼠心肌浸润巨噬细胞再编程及分泌HMGB1的影响及机制；（2）体外研究HMGB1对心肌细胞去分化、增殖及Reg3β释放的影响及机制；（3）体内验证Reg3β/Nsubgt;2/subgt;‑HMGB1环路调控巨噬细胞再编程参与EAM小鼠受损心肌修复的作用和机制。本发明首次提出EAM时心肌细胞与浸润Mφ通过Reg3β/Nsubgt;2/subgt;‑HMGB1环路相互作用，形成正反馈调节，促进Mφ再编程，参与受损心肌修复，为全面了解巨噬细胞在心肌炎发生和转归过程中的作用奠定基础，也为临床治疗心血管疾病提供新的思路和靶点。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种Reg3β/ HMGB1环路调控EAM小鼠巨噬细胞再编程的实验方法。

背景技术

心肌炎是指心肌中有局限性或弥漫性的炎性病变，可由病毒感染、物理、化学等多种因素引起。近年来心肌炎发病率不断增加，病情轻重不等，表现差异很大，婴幼儿病情多较重，成年人多较轻。轻者可无明显病状，重者可并发严重心律失常、心功能不全、心源性休克或心力衰竭甚至是心脏猝死，严重威胁人类的身心健康。因此，阐明心肌炎的炎症损伤及其受损心肌功能重塑的机制，对于积极预防心肌炎的发生、提高人民生活质量具有重要意义；同时为开展以心肌功能重塑为目的免疫治疗奠定基础。由柯萨奇病毒或心肌球蛋白α链（MyHC-α）诱导产生的实验性自身免疫性心肌炎（experimental autoimmune myocarditis，EAM）是研究这一疾病的有效模型。

心肌炎是炎症导致心肌细胞坏死、释放高迁移率族蛋白B1（high mobility groupbox 1，HMGB1）等损伤相关的分子模式，激活心脏定居免疫细胞，如肥大细胞等，导致单核/巨噬细胞（macrophages，Mφ）在心肌组织中大量浸润，参与心肌炎的发生、发展。有研究表明心肌浸润Mφ通过在局部微环境下的再编程参与心肌损伤、心肌细胞再生与心肌功能重塑三个阶段，然而调控心脏Mφ再编程的微环境因素目前仍不完全清楚。Mφ是高度异质性的细胞群体，分布广泛，可塑性强，功能具有多样性，在维持体内稳态、促进组织器官发育、参与受损组织修复、抵抗病原微生物感染及免疫调节中发挥不同的作用。根据存在部位和功能表型的差异，可将Mφ分为两类: 炎性Mφ（inflammatory macrophages，iMφ）和组织定居Mφ（tissue resident macrophages，ResMφ）。两类Mφ具有不同的组织来源与发育路径：iMφ是短寿命的细胞群体，主要由外周循环中的Ly6Chi单核细胞分化而来，当机体出现炎症或组织器官受损时，被招募至炎症部位，并在局部微环境的作用下分化、发育，从而发生抗感染免疫效应；ResMφ主要起源于胚胎时期的卵黄囊（yolk sac，YS）（表型为Ly6C-），少数来源于胎肝以及外周循环中的单核细胞（表型均为Ly6Chi），并且ResMφ定居器官的微环境也可调控其发育，心脏稳态时，ResMφ主要通过Ly6C-Mφ增殖维持自我更新，随着年龄的增加Ly6C-Mφ增殖能力下降，主要依赖招募Ly6Chi单核细胞维持更新；在此过程中，Ly6ChiMφ逐步取代Ly6C-Mφ，致使受损组织修复功能减弱。

各组织巨噬细胞互不相同，具有不同的转录谱和功能。大量的研究表明组织功能需求信号调控Mφ的分化、发育，是决定Mφ表型与功能的重要因素。在EAM发生发展的过程中，局部微环境随之呈现不同的变化，不断促进Mφ功能与表型的再编程，相继成为炎症Mφ（M1）、炎症消退Mφ（M2）和组织修复Mφ（M2），从而参与心肌的炎症发生、炎症消退、修复与再生等过程。因此，阐明Mφ在心肌炎局部微环境下的再编程机制是有效控制和延缓心肌损伤的重要途径。