[发明专利]一种表达hACE2蛋白胞外段的NK细胞的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 202010315558.4 | 申请日： | 2020-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN111518772A | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | 李柱;李勤斌;田云鹏;赵绍军 | 申请（专利权）人： | 厦门诺康得生物科技有限公司;来复（厦门）基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/55;C12N15/867;C12N15/66;A61K38/48;A61P31/14 |
| 代理公司： | 厦门创象知识产权代理有限公司 35232 | 代理人： | 尤怀成;王凤玲 |
| 地址： | 361000 福建省厦门*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 hace2 蛋白 胞外段 nk 细胞 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种表达hACE2蛋白胞外段的NK细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
对hACE2基因进行PCR扩增，并将hACE2基因克隆至pEASY-T1载体中，以便获得载体pEASY-T1-hACE2；
从所述载体pEASY-T1-hACE2上将hACE2基因克隆至慢病毒表达载体pLV-sf GFP(2A)Puro中，以便获得重组质粒pLV-EGFP-hACE2；
将所述重组质粒pLV-EGFP-hACE2转染哺乳细胞，以便获得重组慢病毒；
将所述重组慢病毒与NK细胞混合，150g室温离心4小时，离心结束后加入培养基培养3-4天。
2.如权利要求1所述的表达hACE2蛋白胞外段的NK细胞的构建方法，其特征在于，对所述hACE2基因基因进行PCR扩增的引物对为：
hACE2-F：5′-TATGTCAA GCTCTTCCTGGCCTAGA-3′；
hACE2-R：5′-CGGAAACAGGGGGCTGGTTTCGAG-3′。
3.如权利要求1所述的表达hACE2蛋白胞外段的NK细胞的构建方法，其特征在于，所述哺乳细胞为Lenti-X293T细胞系。
4.如权利要求1所述的表达hACE2蛋白胞外段的NK细胞的构建方法，其特征在于，从所述载体pEASY-T1-hACE2上将hACE2基因克隆至慢病毒表达载体pLV-sf GFP(2A)Puro中，用限制性内切酶Xba I和Xho I分别对pEASY-T1-hACE2和pLV-sf GFP(2A)Puro进行双酶切；用DNA连接酶将酶切得到的hACE2基因产物和pLV-sf GFP(2A)Puro产物进行连接，以便获得重组质粒pLV-EGFP-hACE2。
5.由权利要求1～4中任一项所述的表达hACE2蛋白胞外段的NK细胞的构建方法制得的NK细胞。
6.权利要求5所述的NK细胞的用途，其特征在于，所述用途用于制备抑制COVID-19病毒生长的药物。
7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求5所述的NK细胞和药学上可接受的辅料。
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