[发明专利]一种微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备方法

权利要求书

1.一种微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）醛基化阳离子脂质体的制备

采用逆向蒸发法制备醛基化阳离子脂质体，首先将大豆卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-醛基溶解于三氯甲烷中，加入溶解于三氯甲烷的十八胺进行超声混合得到均匀乳液，然后于旋转蒸发器中去除有机溶剂，得到胶体产物，最后加入去离子水进行水化处理，制备出脂质体乳液；将脂质体乳液经超声后通过聚碳酸酯膜过滤得到醛基化阳离子脂质体；

（2）装载eGFP-IL-4质粒的脂质体的制备

将Opti-MEM培养基加入离心管中，再加入eGFP-IL-4质粒和醛基化阳离子脂质体，轻微晃动后室温下静置配置成混合溶液，即制得装载eGFP-IL-4质粒的脂质体溶液；

（3）定向静电纺丝纤维膜的制备

将透明质酸钠水溶液和β-NGF的BSA溶液制备透明质酸钠-β-NGF水溶胶，再向其中加入Span-80和DCM，于室温高速搅拌得到负载有β-NGF的透明质酸钠微溶胶颗粒的油包水乳液体系，最后依次加入氨基化聚乳酸aPLA和DMF制得微溶胶静电纺丝液；将微溶胶静电纺丝液通过静电纺丝制得定向静电纺丝纤维膜；

（4）微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备

将步骤（3）制得的定向静电纺丝纤维膜浸入步骤（2）制得的装载eGFP-IL-4质粒的脂质体溶液中，于37℃烘箱中孵育不小于24h，装载eGFP-IL-4质粒的脂质体接枝在定向静电纺丝纤维膜的表面，即制得微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维。

2.根据权利要求1所述的一种微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）的具体条件为：采用逆向蒸发法制备醛基化阳离子脂质体，首先160mg大豆卵磷脂、40mg胆固醇、4mg醛基磷脂溶解于5mL三氯甲烷中，称取5mg十八胺溶解在1mL三氯甲烷中，将两者混合后进行超声得到均匀乳液，之后于旋转蒸发器中去除有机溶剂，得到胶体产物，最后加入去离子水进行水化处理，制备出脂质体乳液，经过超声和450nm、220nm聚碳酸酯膜过滤得到醛基化阳离子脂质体。

3.根据权利要求1所述的一种微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中eGFP-IL-4质粒和醛基化阳离子脂质体的质量体积比以μg/μL计为1:1、1:1.5、1:2、1:2.5或1:3。

4.根据权利要求1所述的一种微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中微溶胶静电纺丝液的具体制备条件为：制备质量分数为1wt%的透明质酸钠溶液，β-NGF重悬于0.1wt%BSA溶液中最终浓度为100μg/mL，将10μL β-NGF与50μL 1wt%透明质酸钠溶液混合制得透明质酸钠-β-NGF水溶胶，再加入0.01g Span-80和4g DCM，室温下高速搅拌30min，得到负载有β-NGF的透明质酸钠微溶胶颗粒的油包水乳液体系；最后依次加入0.5g氨基化聚乳酸aPLA和2g DMF制得微溶胶纺丝溶液。

5.根据权利要求1所述的一种微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中静电纺丝的具体条件为：推进泵速度为70μL/min，电压15-18kV，针头距平行电极接收器15cm。

6.权利要求1-5任一项所述的制备方法制得的微环境响应性免疫调控促神经再生微纳米纤维。