[发明专利]胃H+

权利要求书

1.胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测引物，其特征在于，包括表1所示的分别针对T1327C、T2960C、G8815A、C9708T、T9837C和A9875G基因多态性检测位点的特异性引物：

表1 PCR引物

2.权利要求1所述检测引物在制备胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测试剂中的应用。

3.一种胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的特异性检测引物。

4.根据权利要求3所述的胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测试剂盒，其特征在于，还包含用于扩增含有所述6个突变位点的DNA的特异性引物的扩增反应液，所述扩增反应液组成如表2所示：

表2 PCR反应体系

5.根据权利要求3所述的胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测试剂盒PCR扩增程序设置如表3所示：

表3 PCR反应程序设置

6.利用权利要求3-5中任一所述试剂盒检测样本质子泵H⁺/K⁺-ATPase基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)合成表1所示的胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测引物；

(2)以样本胃H⁺/K⁺-ATPase基因组DNA为模板，利用步骤(1)合成的引物进行PCR扩增，产物纯化，毛细管自动测序，获得样本的基因型；

(3)样本基因测序后得到荧光吸收峰图和碱基排列顺序，用Lasergene软件进行分析比对，将出现基因突变的位点进行遗传密码子比对，得到特定氨基酸变化情况。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，在NCBI数据库中找到胃H⁺/K⁺-ATPaseα亚单位的DNA序列，确定与PPIs靶点相关的碱基突变位点，以该特定碱基位点为中心截取长短适宜的DNA序列片段，根据该位点的序列信息和引物设计规则，用Primer 5.0设计引物。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，引物扩增前首先配制Supermix液，混匀后分配到反应管中，每管24μL，最后加入DNA模板1μL。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，PCR完毕，用1.5％的琼脂糖胶进行粗鉴定，然后采用3730XL型DNA测序仪进行毛细管自动双向测序确定碱基序列。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性温度30s、58℃退火温度30s、72℃延伸50s，共35个循环；72℃终末延伸5min、4℃保持Forever。