[发明专利]胃H+

说明书

本发明公开了一种胃H⁺/K⁺‑ATPase基因多态性检测引物、检测与质子泵抑制剂(PPIs)药效靶点胃H⁺/K⁺‑ATPase相关基因多态性的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括质子泵抑制剂药效靶点胃H⁺/K⁺‑ATPase相关的6个基因突变位点T1327C、T2960C、G8815A、C9708T、T9837C和A9875G的特异性引物以及扩增反应液。本发明提供一种快速检测多个具有临床意义的单核苷酸多态性(SNP)位点上碱基和氨基酸序列变化的方法，准确、高效并具有较高的实用性。本发明所述检测方法利用药物基因组学技术，协助个体化给药、保证用药安全并为精准的PPIs治疗方案提供依据。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性检测引物、试剂盒及检测方法。

技术背景

近年来，随着人们对胃壁细胞分泌功能及胃粘膜防御功能的深入研究，抗消化性溃疡药物取得了突破性进展，药物作用从传统的抗酸解痉发展到抑制胃壁细胞的胃酸分泌功能和增强胃壁细胞防御功能。质子泵抑制剂(PPIs)被誉为20 世纪消化系统疾病治疗史上的一座里程碑，在临床上主要用于消化性溃疡、根除幽门螺旋杆菌治疗、卓-艾综合征和胃食管返流等相关疾病的治疗。PPIs在治疗酸相关性溃疡中发挥着重要的作用，具有较高的市场占有率和临床使用率。目前的证据表明，该药的不良反应少，应用较安全，对大部分患者而言，接受PPIs 治疗的获益大于风险。而对于长期使用PPIs的患者，其药物的疗效和不良反应都存在着较大的个体化差异，这是因为不同个体之间的基因型存在差异即存在基因多态性。要了解遗传因素对药物效应的影响，研究单核苷酸多态性(SNP)的功能意义非常重要。SNP是属于第三代遗传标记，广泛地分布于染色体上。SNP 主要是指由基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性，包括单碱基的转换、颠换以及单碱基的插入和缺失等。SNP将提供一个强有力的工具，用于高危群体的发现、疾病相关基因的鉴定、药物的设计和测试以及生物学的基础研究等。怎样从数百万SNP中，找到确有临床意义的功能性SNP，是药物遗传学和个体化医学所面临的重大挑战。

而对于质子泵抑制剂，目前了解最多的是PPIs代谢酶CYP2C19相关的基因多态性。对EM(快代谢型)人群，由于CYP2C19等位基因突变造成功能的改变，PPIs代谢加快血药浓度降低，从而使其酸抑制效应减低疗效减弱。但目前对质子泵抑制剂作用的靶点相关的基因多态性知之甚少，了解胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性与PPIs药动学及药效学的影响能为PPIs临床上精准用药以消除个体化差异提供更直接的依据。

胃H⁺/K⁺-ATPase，即胃H⁺/K⁺-ATP酶，又名质子泵，是一个由α亚基和β亚基组成的低聚物异源二聚体[αβ]。α亚单位包含10个跨膜片段(TM)，由1035 个氨基酸组成，与ATP结合后利用ATP提供的能量催化和转运H⁺和K⁺，是质子泵抑制剂作用的药效靶点。经过前期研究，我们发现：胃H⁺/K⁺-ATPase基因多态性在PPIs抑酸效应中起着重要作用，PPIs的抑酸效应与T1327C、T2960C、 G8815A、C9708T、T9837C和A9875G基因存在密切关系。检测患者质子泵抑制剂药效靶点相关的基因型能为针对各类PPIs进行临床给药方案的优化提供帮助，个体化精准用药能大大提高药物的治疗效果同时尽可能减小长期使用PPIs 造成的不良反应。因此，T1327C、T2960C、G8815A、C9708T、T9837C和A9875G 与质子泵抑制剂抑酸效应的相关性使其成为具有临床意义的SNP位点。

本申请拟提供一种高效、准确的检测上述单核苷酸多态性的方法，为协助个体化给药、保证用药安全和有效提供技术支撑。

发明内容