[发明专利]一种基于双重化学修饰的血红蛋白氧载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体，其特征在于，基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体中血红蛋白的两个Val-1(alpha)残基被羧甲基化，两个Lys-99(alpha)残基被分子内交联，并在此基础上经过八臂聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯修饰得到，所述八臂聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯为带有8个琥珀酰亚胺基团的聚乙二醇。

2.权利要求1所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：用乙醛酸对血红蛋白进行羧甲基化处理，再用双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯对血红蛋白进行分子内交联处理；得到的产物随后与带有8个琥珀酰亚胺基团的聚乙二醇反应，终止反应，得到基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体。

3.如权利要求2所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，包括如下步骤：

（1）将血红蛋白进行脱氧处理，得到脱氧血红蛋白；脱氧血红蛋白与乙醛酸和氰基硼氢化钠混合，在保护性气体保护下进行反应，终止反应；

（2）将步骤（1）得到的产物与六磷酸肌醇混合，在保护性气体保护下进行反应；随后与双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯混合，在保护性气体保护下进行反应，终止反应；

（3）将步骤（2）得到的产物与带有8个琥珀酰亚胺基团的聚乙二醇反应，终止反应，得到基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体。

4.如权利要求3所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述脱氧血红蛋白、乙醛酸与氰基硼氢化钠的摩尔比为1:(1-4):(10-20)；所述反应的温度为0-8℃，时间为2-5h；终止反应使用甘氨酸；终止反应后透析除杂，产物用QSepharose High Performance阴离子交换层析介质进行分离纯化。

5.如权利要求4所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述脱氧血红蛋白、乙醛酸与氰基硼氢化钠的摩尔比为1:2:20。

6.权利要求1所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：用双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯对血红蛋白进行分子内交联处理，再用乙醛酸对血红蛋白进行羧甲基化处理；得到的产物随后与带有8个琥珀酰亚胺基团的聚乙二醇反应，终止反应，得到基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体。

7.如权利要求6所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，所述用双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯对血红蛋白进行分子内交联处理具体包括如下步骤：

（1）将血红蛋白进行脱氧处理，得到脱氧血红蛋白；

（2）将步骤（1）得到的脱氧血红蛋白与六磷酸肌醇混合，在保护性气体保护下进行反应；

（3）将步骤（2）产物与双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯混合，在保护性气体保护下进行反应，终止反应。

8.如权利要求7所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述脱氧血红蛋白与六磷酸肌醇的摩尔比为1:(5-10)，所述反应的温度为20-30℃，时间为1-5h；步骤（3）中所述产物与双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯的摩尔比为1:(0.5-2)，所述反应的温度为20-30℃，时间为2-6h；终止反应使用甘氨酸。

9.如权利要求8所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述脱氧血红蛋白与六磷酸肌醇的摩尔比为1:8。

10.如权利要求8所述的基于三重化学修饰的血红蛋白氧载体的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述产物与双(3,5-二溴水杨酸)富马酸酯的摩尔比为1:1。