[发明专利]非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物、检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物，其特征在于包括用于扩增非洲猪瘟病毒野毒株的1组特异性引物对和1条LNA-Taqman探针：

所述的特异性引物对的序列如Seq ID No.1和Seq ID No.2所示；

所述的LNA-Taqman探针的序列如Seq ID No.3所示；

所述的LNA-Taqman探针的第11位、12位和13位碱基为锁核酸修饰碱基。

2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物，其特征在于：所述的LNA-Taqman探针在5′端标记荧光物质，3′端标记淬灭物质。

3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物，其特征在于：所述的5′端标记荧光物质为标记FAM，3′端标记淬灭物质为标记BHQ1。

4.权利要求1-3任一项所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物在制备非洲猪瘟病毒野毒株检测试剂盒中的应用。

5.一种非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于包括权利要求1-3任一项所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物。

6.根据权利要求5所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：

所述的检测试剂盒还包含阳性对照；

所述的阳性对照为包含非洲猪瘟病毒野毒株的MGF360-505R基因的重组质粒。

7.根据权利要求6所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的重组质粒的载体为pUC57。

8.权利要求5、6或7所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测试剂盒在鉴定和/或检测非洲猪瘟病毒野毒株中的应用，所述的应用为非疾病诊断目的的用途。

9.一种非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测方法，所述的方法为非疾病诊断目的的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）提取样品的基因组DNA；

（2）配制锁核酸探针荧光定量PCR反应体系；

（3）将步骤（2）中配制的锁核酸探针荧光定量PCR反应体系置于荧光定量PCR仪中，进行扩增反应；

（4）将基因组DNA的循环阈值Ct与标准曲线对照，得到基因组DNA中非洲猪瘟病毒基因片段拷贝浓度；

其中，上游引物、下游引物和探针的序列依次如Seq ID No.1、Seq ID No.2和Seq IDNo.3所示；探针的第11位、12位和13位碱基为锁核酸修饰碱基。

10.根据权利要求9所述的非洲猪瘟病毒野毒株的锁核酸探针荧光定量PCR检测方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的锁核酸探针荧光定量PCR反应体系为：2×Premix Ex Tag 10 μL、浓度为10 μmol/L的上游引物0.4 μL、浓度为10 μmol/L的下游引物0.4 μL、浓度为10 μmol/L的探针0.2 μL、模板DNA 1 μL、灭菌水加至20 μL；

步骤（3）中所述的扩增反应的反应条件为：预变性95℃、10 min；95℃、15 s，60℃、30s，扩增45个循环。