[发明专利]Plackett-Burnman联合响应面法优化提取杠板归槲皮素的方法

说明书

本发明公开了一种Plackett‑Burnman联合响应面法优化提取杠板归槲皮素的方法。所述方法以杠板归中槲皮素的提取量为考察指标，采用Plackett‑Burnman联合响应面法进行提取研究，从而得到杠板归槲皮素的最佳提取工艺：25倍59.92％乙醇浸泡24h，60℃下回流提取3.4h，提取2次；该提取工艺条件下，槲皮素平均提取量为0.34mg/g。本发明优化提取工艺所制的提取物，抗菌活性高，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的MIC分别为3.12、6.24、6.31g/L，MBC分别为12.52、24.08、25.41g/L；可用于治疗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌引起的畜禽细菌性疾病。

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，尤其是Plackett-Burnman联合响应面法优化提取杠板归槲皮素的方法。

背景技术

杠板归为蓼科蓼属植物杠板归(Polygonum perfoliatum L.)的全草，民间习称蛇倒退、猫爪刺、杠板归等，其主要成分有黄酮类、有机酸类、萜类等。《中国兽药典》2015版第二部中规定槲皮素为杠板归的主要成分。现代药理学研究表明，杠板归具有抗菌、抗病毒、降血压、抗肿瘤等作用，临床上杠板归常用于治疗慢性湿疹、乳腺炎、百日咳、泻痢、黄疸、跌打肿痛等疾病。杠板归的煎煮剂对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、炭疽杆菌等均有较强的抑制作用，乙酸乙酯、正丁醇提取物对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌具有较强的抑制作用，75％乙醇提取物对多种细菌具有广谱抗菌性。槲皮素具有广谱抗菌性，并且对革兰氏阴性菌的抗菌作用强于革兰氏阳性菌。如文献《药用植物扛板归抗菌活性研究》(现代医药卫生,2013)中研究表明：杠板归的75％乙醇，乙酸乙酯和正丁醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌等具有良好的抑菌效果。

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌是引起畜禽细菌性疾病的常见致病菌。因致病性细菌血清型众多，无法制备出具有针对性的疫苗。抗生素是治疗此类疾病有效的手段，但长期使用抗生素导致致病菌的耐药性严重，研究表明，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌多种抗生素具有耐药作用。抗生素残留可以导致致病菌的耐药性增强并转移给人类，引起动物内源性感染和二重感染，使动物免疫力降低，抗原质量降低，降低疫苗的使用效果。寻找抗生素替代物和新途径，消除或减轻禁用抗生素带来的一系列影响，是我国畜牧业急需解决的问题。

目前，杠板归在临床上的应用研究较多，但是杠板归有效成分在兽药领域的研究应用较少，关于杠板归有效成分槲皮素提取的优化研究较长。

文献1《正交设计法优选杠板归提取工艺》(内蒙中医药，2009)中以杠板归中主要药效物质总黄酮的含量为指标,以1g杠板归细粉为原料，取乙醇浓度、乙醇量、提取时间三个因素,并相应选取三个水平,按L₉(3⁴)正交表进行正交试验,运用紫外分光光度法检测,优选出最佳提取工艺。结果:优选出的最佳提取工艺为20mL70％乙醇,回流提取1h。

文献2《正交实验法优选杠板归的提取工艺研究》(贵州医药，2009)中以杠板归中槲皮素含量为指标，提取次数为1次，以盐酸乙醇浓度、溶剂用量、回流提取时间为因素，进行正交试验，优选出最佳提取工艺。结果:优选出的最佳提取工艺为50倍20％盐酸乙醇、回流提取一次2h。

上述文献采用的是正交设计法优化杠板归有效成分的提取，正交设计法可同时考虑多种因素，寻求最佳因素组合，但是无法找到整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值。

本发明研究者对现有技术杠板归有效成分槲皮素的提取工艺进行改进和优化，采用PBD和BBD设计，优化建立杠板归中槲皮素的提取工艺，并验证了提取物的抗菌活性，为杠板归的的开发利用提供了理论依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Plackett-Burnman联合响应面法优化提取杠板归槲皮素的方法，与现有技术相比，杠板归槲皮素提取率高。

具体通过以下技术方案实现的：