[发明专利]一种类I型胶原蛋白纤维的制备方法

权利要求书

1.一种用于表达类I型胶原蛋白的蛋白单链，其特征在于，氨基酸序列如所示；其中，V-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；(GPP)n中的5＜n≤30；CL-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.2~6任一序列所示。

2.根据权利要求1所述的蛋白单链，其特征在于，所述V-domain和(GPP)n之间通过LVPRGSP连接。

3.根据权利要求2所述的蛋白单链，其特征在于，所述V-domain前端具有6×His标签。

4.编码权利要求1~3任一所述蛋白单链的基因。

5.携带权利要求4所述基因的质粒或细胞。

6.根据权利要求5所述的质粒，其特征在于，包括：pColdIII系列或pET系列的质粒。

7.根据权利要求5所述的细胞，其特征在于，为大肠杆菌细胞，包括E. coli BL21、E. coli BL21（DE3）、E. coli JM109、E. coli DH5α或E. coli TOP10。

8.类I型胶原蛋白，其特征在于，由三条如所示的蛋白单链围绕一个共同的中心轴盘绕，构成三螺旋结构；

其中，V-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；(GPP)n中的5＜n≤30；CL-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.2~6任一序列所示。

9.由权利要求8所述类I型胶原蛋白高聚自组装形成的胶原蛋白纤维。

10.一种类I型胶原蛋白纤维的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）合成编码权利要求1所述类I型胶原蛋白的蛋白单链的基因；

（2）将步骤（1）所述基因与载体连接，转化至目的细胞中表达并纯化；

（3）向步骤（2）的纯化产物中加入胰蛋白酶，于20~25℃温度下反应至少6 h；

（4）将步骤（3）获得的胶原蛋白配制成浓度为0.1~1 mmol/L的溶液，于2℃~37℃静置。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）的基因的核苷酸序列如SEQID NO.13~15，17~18任一所示。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）的静置时间不少于24 h。

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）是冻干后的胶原蛋白配制成浓度为0.5 mmol/L的溶液，于4℃~37℃静置至少2天。

14.权利要求1~3任一所述的类I型胶原蛋白单链，或权利要求4所述的基因，或权利要求5~7任一所述的质粒或细胞，或权利要求8所述的类I型胶原蛋白，或权利要求9所述的胶原蛋白纤维，或权利要求10~13任一所述的制备方法在制备含有胶原蛋白的产品方面的应用。