[发明专利]针对慢性淋巴细胞白血病的免疫效应细胞、其制备方法和应用

说明书

本发明首次揭示了一种靶向CD32b的嵌合抗原受体(CAR)，由该CAR修饰的免疫效应细胞，其制备方法及其在抑制慢性淋巴细胞白血病中的应用。本发明为难治性的慢性淋巴细胞白血病提供了新的治疗方案。

技术领域

本发明属于医学生物领域，更具体地，本发明涉及一种针对慢性淋巴细胞白血病的免疫效应细胞、其制备方法和应用。

背景技术

本领域中基于免疫效应细胞的过继性免疫治疗在部分肿瘤中取得了一定的效果，并且该种免疫治疗方法可以克服抗体治疗的上述缺陷，但在大多数肿瘤中的疗效仍不能令人满意[Grupp SA，et al.Adoptive cellular therapy.Curr Top Microbiol Immunol.，2011；344:149-72]。近年来，根据细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte，CTL)对靶细胞的识别特异性依赖于T淋巴细胞受体(T Cell Receptor，TCR)的发现，将针对肿瘤细胞相关抗原的抗体的scFv与T淋巴细胞受体的CD3ζ或FcεRIγ等胞内信号激活基序融合成嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)，并将其通过如慢病毒感染等方式基因修饰在T淋巴细胞表面。这种CAR T淋巴细胞能够以主要组织兼容性复合物(MajorHistocompatibility Complex，MHC)非限制性方式选择性地将T淋巴细胞定向到肿瘤细胞并特异性地杀伤肿瘤。CAR T细胞是肿瘤免疫治疗领域的一种具有良好前景的免疫治疗策略。

嵌合抗原受体(CAR)由抗原识别区、跨膜区、胞内信号区构成，一般通过病毒转导或者电穿孔，使CAR分子表达在T细胞表面形成CAR-T细胞。CAR-T细胞通过胞外抗原识别区识别肿瘤抗原，招募T细胞到肿瘤细胞表面，并通过胞内信号区激活T细胞，使T细胞行使杀伤作用，以杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的。

目前淋巴系统恶性肿瘤的治疗存在许多困难，特别是临床上常常遇到的疾病复发和难治。慢性淋巴细胞白血病(CLL)是一种临床多线治疗尚不能治愈，传统药物化疗和新兴的小分子抑制剂均不能完全消除肿瘤。因此，对于CLL高危患者及多重复发患者需要探索更先进的治疗方法，比如CAR-T细胞疗法。CD19是簇分化抗原的一种，是B细胞增殖、分化、活化及抗体产生有关的重要膜抗原，其在不同分化阶段的B淋巴细胞表面均有特异性表达，95％以上的B细胞淋巴瘤和B淋巴细胞白血病均表达CD19抗原。目前，CD19 CAR-T已经在儿童急性淋巴细胞白血病上取得了理想的治疗效果，可诱导90％以上的急性淋巴细胞白血病(ALL)患者完全缓解。但是，令人费解的是，虽然CLL肿瘤细胞上CD19普遍表达，但多中心临床实验表明CD19 CAR-T只能诱导26％左右的CLL患者缓解，与ALL治疗效果差异悬殊。这一现象在说明CLL患者需要与ALL不同的治疗方案的同时，也说明了并不能仅考虑肿瘤细胞表明高表达抗原而确定CAR-T的治疗效果。

研发CAR修饰的免疫效应细胞时，所靶向的抗原实际上是一种较为关键的选择。然而，鉴于体内基因表达的复杂性以及各种不可控因素，成功选择到一个合适的用于基于CAR的治疗的基因是非常困难的，在本领域的大量研究工作中，很多肿瘤特异性的抗原被发现并不适合于基于CAR修饰的靶向治疗。此外，尽管CAR-T疗法有了一些成功病例，但却受到其生产的复杂性和与细胞活性相关的不良事件的挑战，比如细胞因子风暴(CRS)等。目前很多肿瘤尚没有有关CAR T细胞治疗的报道

综上，本领域亟待针对CLL这一疾病找到一个更为理想的抗原分子，以达到更好的治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于提供慢性淋巴细胞白血病或Burkitt’s淋巴瘤的CAR-T治疗载体、其构建方法及应用。

在本发明的第一方面，提供一种嵌合抗原受体(CAR)，所述的嵌合抗原受体包含顺序连接的：胞外结合区，跨膜区和胞内信号区，其中所述胞外结合区包含特异性识别CD32b的蛋白。