[发明专利]生物催化合成L-4-Cl-犬尿氨酸或L-4-Br-犬尿氨酸的方法及应用

权利要求书

1.一种生物催化合成L-4-Cl-犬尿氨酸或L-4-Br-犬尿氨酸的方法，包括以6-Cl-吲哚或6-Br-吲哚和L-丝氨酸为底物，Pf0A9酶和Tar13酶为催化剂进行催化反应后，加酸溶液进一步反应，提纯即得，所述方法中的催化反应的体系中包括：磷酸吡哆醛。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法中的催化反应的体系中包括缓冲液，缓冲液的pH为 6.5~8.0。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的催化反应的条件是：25~37 ^oC反应24~48 h。

4.根据权利要求1所述的方法，所述的酸溶液为pH小于等于2的溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，催化体系中包括：6-Cl-吲哚或6-Br-吲哚0.2~5mM、L-丝氨酸0.2~5mM、磷酸吡哆醛 0.01~0.05 mM、Pf0A9酶100~500 U/mL、Tar13酶100~500 U/mL，所述的浓度为该物质在催化体系中的终浓度。

6.根据权利要求1所述的方法，加酸溶液反应的温度与催化反应温度相同。

7.根据权利要求2所述的方法，所述的缓冲液为如下两种缓冲溶液以体积比1：0.5~ 1：2混合：KPi缓冲液50 mM KH₂PO₄, pH = 8.0和缓冲液50 mM Tris-HCl, 20 mM NaCl, 10%甘油, pH = 8.0。

8.一种L-4-Cl-犬尿氨酸或L-4-Br-犬尿氨酸的生物发酵生产方法，包括：

将Pf0A9-Tar13双基因表达质粒转入大肠杆菌中，诱导表达后加入6-Cl-吲哚或6-Br-吲哚、L-丝氨酸和磷酸吡哆醛，将培养温度调至25~37^oC并持续搅拌继续培养，然后加入酸溶液，经纯化后即得；

所述的Pf0A9-Tar13双基因表达质粒通过将SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的序列插入到pACYCDuet-1载体的两个基因表达框中得到。

9.权利要求1或权利要求8所述的方法在制备L-4-Cl-犬尿氨酸或L-4-Br-犬尿氨酸中的应用。