[发明专利]一种基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法

权利要求书

1.一种基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

1)大鼠肝脏脱细胞支架制备：

1.1)动物准备：大鼠称重，以异氟烷进行气体吸入麻醉并维持，麻醉生效后，SD大鼠仰卧位，用75％酒精消毒腹部皮肤，分层开腹暴露肝脏；

1.2)不可逆电穿孔作用肝脏：应用卡钳式电极夹起大鼠肝脏左外叶区域，给予高压脉冲电场处理；

1.3)经门静脉在体灌注：不可逆电穿孔处理结束后，经大鼠门静脉进行插管，用肝素化PBS液进行灌注，同时剪开肝下下腔静脉，见肝脏充盈且颜色逐渐变浅，逐渐游离肝脏周围组织及韧带，取下肝脏浸入肝素化PBS液中；

1.4)体外灌注脱细胞：将取下的肝脏放入洁净容器内，用去离子水进行单向灌注，可见不可逆电穿孔作用区域细胞逐渐脱除，透明支架结构逐渐显现；

1.5)去离子水灌注结束后，PBS单向灌注30min，完成支架制备。

2.根据权利要求1所述的基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法，其特征在于：所述步骤1.2)中高压脉冲电场处理参数为2000V/cm,90μs，70个脉冲，1HZ。

3.根据权利要求2所述的基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法，其特征在于：所述步骤1.2)中卡钳式电极为1cm卡钳式电极。

4.根据权利要求3所述的基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法，其特征在于：所述步骤1.3)中是用100U/mL的肝素化PBS液以5mL/min的速度进行灌注。

5.根据权利要求4所述的基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法，其特征在于：所述步骤1.4)中单向灌注2h，灌注速度5mL/min。

6.根据权利要求1至5任一权利要求所述的基于不可逆电穿孔技术的肝脏脱细胞支架构建方法，其特征在于：所述步骤1)之后还包括步骤2)肝脏脱细胞支架效果评价：

2.1)脱细胞肝脏支架组织形态学评价；

2.2)脱细胞肝脏支架扫描电镜观察。