[发明专利]一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法

权利要求书

1.一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法，其步骤如下：

（1）由DNA合成仪合成标记有荧光基团的氯霉素CAP适配体荧光探针，所使用CAP序列适配体探针序列为：5'-ACT TCA GTG AGT TGT CCC ACG GTC GGC GAG TCG GTG GTA GCC C-3'，3' 端接有一个ROX荧光基团，适配体荧光探针由高效液相色谱纯化；

（2）将步骤（1）制备的标记有荧光基团的CAP适配体荧光探针溶于Tris-HCl缓冲溶液中，配置成反应液A；

所述Tris-HCl缓冲溶液的浓度为0.2 mol/L、pH为6.8-8.3；

所述Tris-HCl缓冲溶液中含有20-100mmol/L的NaCl；

（3）合成铜-锆双金属有机框架材料Cu/UiO-66，依次包括以下步骤：

（a）合成UiO-66晶体：在反应釜中加入1,4-苯二甲酸和四氯化锆，然后向其中加入DMF和冰醋酸做溶剂，充分搅拌后密封反应釜，在120℃下恒温反应20-30 h，反应结束后离心，所得固体洗涤、真空干燥，得到UiO-66晶体；

所述1,4-苯二甲酸和四氯化锆加入的质量比为25：（20-35）；

（b）合成Cu/UiO-66晶体：向步骤（a）合成的UiO-66晶体中加入CuCl₂·2H₂O，然后向其中加入DMF为溶剂，超声分散后转移至反应釜中并密封，在85℃下恒温反应20-30 h，反应结束后离心、洗涤、真空干燥得到铜-锆双金属有机框架材料Cu/UiO-66；

所述UiO-66晶体与CuCl₂·2H₂O加入的质量比为100 ：（80-100）；

（4）将铜-锆双金属有机框架材料Cu/UiO-66均匀分散在Tris-HCl缓冲溶液中，制备得到反应液B；

（5）将步骤（2）的反应液A与步骤（4）的反应液B进行混合，混合后的溶液中标记有荧光基团的CAP适配体荧光探针与Cu/UiO-66的比例为1 mol：1.8 g，混合后在室温下反应10-60min使其偶联，反应完全后得到混合液C，混合液C即为传感器Cu/UiO-66@Aptamers；

所述反应液A与反应液B的体积比为1:1；

所述反应液A中标记有荧光基团的CAP适配体荧光探针的浓度为10-200nmol/L；

（6）取50 μL的混合液C至微量比色皿中，向其中加入不同浓度的CAP标准溶液50 μL，补充Tris-HCl缓冲溶液至总体积为500 μL，以适配体探针3' 端所连接的荧光基团ROX的斯托克斯位移30 nm为基准，设定激发波长为490 nm，并在520-700 nm范围内进行同步荧光扫描；

以荧光染料ROX的荧光强度变化值为纵坐标，以CAP标准溶液的浓度为横坐标，得到相应的荧光强度与CAP浓度之间的工作曲线，并拟合回归方程；

（7）将步骤（6）中的CAP标准溶液换为待检测的溶液，通过同步荧光扫描所得到的荧光强度的变化值，结合步骤（6）中所得到的工作曲线及回归方程，实现对实际样品中CAP的定量检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）中的反应时间为40 min。