[发明专利]一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法

说明书

本发明涉及化学传感器领域，具体涉及一种基于Cu/UiO‑66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法。其步骤为：首先将标记有荧光基团的氯霉素适配体荧光探针溶于缓冲溶液中，配置为反应液A；第二步将铜‑锆双金属有机框架材料Cu/UiO‑66均匀分散在缓冲溶液中，得到反应液B；第三步将配置好的反应液A、反应液B与适量的缓冲溶液混合得到混合液C；第四步在混合液C中加入一定量的待检测氯霉素含量的溶液，反应一段时间后通过同步荧光扫描检测其荧光强度，实现其定量检测。使用此方法实现的对氯霉素的检测方法有简单快捷、灵敏度高、特异性强、检出限低等优点。

技术领域

本发明属于化学传感器领域，具体的涉及到一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测氯霉素的方法。

背景技术

以氯霉素(Chloramphenicol,CAP)为例的一系列抗生素药物分子，具有良好的杀菌消炎作用，又因其广普适用，并且价格相对便宜，已经被广泛的应用于疾病预防与治疗、畜牧与水产养殖产业中。但长期食用含有抗生素的食物将引起儿童免疫力底下，影响肠道菌群导致营养不良，降低身体对病原体的抗性，使得部分致病菌产生抗药疾病难以治愈，严重时会导致肝肾损伤。据报道由于抗生素的滥用和误用，从而导致出现了许多药物无法治疗的“超级细菌”，最后威胁到人体健康，主要的不良反应就是抑制骨髓的造血机能，最终导致死亡。因此，开发一种可以低成本、可快速检测抗生素一类的药物分子的技术具有十分重要的意义。

现阶段已有的对于抗生素药物分子的定性定量检测方法主要有色谱法与光谱法两种，但这些方法大部分需要依靠多种仪器的联用，最终得到的数据需要进行复杂的组合计算后方可得到待测物质的种类与含量。虽然仪器联用的方法的精确度相对较高，比如现有技术中使用国标方法GB T 22338-2008中动物源性食品中氯霉素类药残留量的测定，使用气象色谱-质谱法、液相色谱质谱法对于氯霉素的检出限为0.1μg/kg，但操作过程过于繁琐，费时费力，成本也相对高昂，对操作人员的试验水平也有一定的要求。金属有机骨架(Metal-Organic Framework,MOFs)因其易于调节的结构、有序的晶态孔道和高的比表面在化学传感器领域得到了广泛地应用。基于上述研究背景，本发明以一种双金属MOFs材料为猝灭基团，结合标记有荧光基团的适配体荧光探针为平台，开发了一种高灵敏度、高选择性的对于抗生素药物分子的荧光检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于Cu/UiO-66金属有机框架猝灭的同步荧光检测CAP的方法。该方法降低了原有的检测方法的检出限，并且检测过程方便快捷，检测时间短，可实现对于CAP的高灵敏度、高选择性检测。

在本发明中，以铜-锆双金属有机框架材料Cu/UiO-66结合带有ROX荧光基团标记的适配体荧光探针构成的CAP检测传感器，来实现对CAP的高选择性、高灵敏度的检测，具体技术方案如下：

(1)由DNA合成仪合成标记有荧光基团的CAP适配体荧光探针，所使用CAP序列适配体探针序列为：5'-ACT TCA GTG AGT TGT CCC ACG GTC GGC GAG TCG GTG GTA GCC C-3'，3'端接有一个ROX荧光基团，适配体荧光探针由高效液相色谱纯化；

(2)将步骤(1)制备的标记有荧光基团的CAP适配体荧光探针溶于Tris-HCl缓冲溶液中，配置成反应液A；

(3)合成铜-锆双金属有机框架材料Cu/UiO-66，依次包括以下步骤：

(a)合成UiO-66晶体：在反应釜中加入1,4-苯二甲酸和四氯化锆，然后向其中加入DMF和冰醋酸做溶剂，充分搅拌后密封反应釜，在120℃下恒温反应20-30h(优选为24h)，反应结束后离心，所得固体洗涤、真空干燥，得到UiO-66晶体；