[发明专利]鸡球虫多价重组蛋白疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种鸡球虫多价重组蛋白疫苗及其制备方法和应用。所述鸡球虫多价重组蛋白疫苗包含4种鸡球虫蛋白：柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白41，柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白22，巨型艾美耳球虫配子体蛋白56，和堆型艾美耳球虫裂殖子蛋白Ea3‑1E。将上述4种鸡球虫蛋白分别与大肠杆菌表达载体相连获重组表达载体，表达重组蛋白。将不同种重组蛋白按比例与佐剂混合，免疫母鸡后的后代雏鸡接种球虫后与未免疫母鸡后代雏鸡相比，能够有效提高接种球虫的雏鸡存活率和相对增重，卵囊排出量减少，显示了良好的母源免疫效果。

技术领域

本发明是关于生物兽药技术领域，特别是关于一种鸡球虫多价重组蛋白疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

鸡球虫病(Coccidiosis)是由7种艾美耳球虫感染引起的严重危害养鸡业的疾病之一，呈世界性分布。引起鸡球虫病的病原包括柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)、巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)、堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、布氏艾美球虫(Eimeria brunetti)、毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)、早熟艾美耳球虫(Eimeriapraecox)和和缓艾美耳球虫(Eimeria mitis)。不同种球虫寄生于鸡的不同肠段上皮细胞，引起以肠炎、出血、增重下降甚至死亡等一系列危害，危害程度与球虫种类、感染量及鸡只日龄等密切相关。生产中，鸡球虫病常为混合感染，发病率高达50-70％，死亡率为20-30％，严重时高达80％。每年世界范围内约有400亿只鸡感染鸡球虫病，全球每年因鸡球虫病造成的经济损失约数十亿美元。目前，鸡球虫病的防控主要依靠抗球虫药物和活疫苗，但由于耐药性和药物残留等问题，抗球虫药物的使用受到了限制；活疫苗的保存、运输、应用以及管理等等问题也限制了其广泛应用。另外，已经在有些国家注册的球虫疫苗是巨型艾美耳球虫的配子体蛋白疫苗，通过提取的巨型艾美耳球虫的天然蛋白制成，主要成分为配子体阶段的EmGAM56、EmGAM82和EmGAM230蛋白，有较好的母源免疫保护效果。但是制作成本非常高，难以推广应用。因此，研制防控鸡球虫病的新产品和新方法具有重要意义。

鸡球虫重组蛋白疫苗的研制关键在于保护性抗原的筛选。在球虫的入侵、发育和繁殖过程中的多种分泌蛋白不仅在其生命活动中具有重要意义，而且可能是球虫的重要免疫原。因此，筛选出具有较好免疫原性的抗原，进行有效组合，组成重组蛋白疫苗。重组蛋白疫苗与强毒苗、弱毒苗以及天然蛋白疫苗相比，具有安全性高、纯度高、稳定性好、产量高等优点，具有较好的应用前景。

禽类的母源免疫(Maternal immunization)是指将抗原免疫母鸡后，母鸡产生特异性的抗体能通过卵黄抗体的形式传递给后代雏鸡，并在一定时间内为雏鸡提供保护。母源免疫在禽养殖业上已有应用母源免疫的优点在于免疫一只母鸡就可使上百只雏鸡获得很好的保护作用，且免疫程序简单方便和成本低。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡球虫多价重组蛋白疫苗，该鸡球虫多价重组蛋白疫苗是通过筛选鸡球虫的优质抗原组合成重组蛋白疫苗，其能够诱导母鸡较好的免疫反应，并且母源抗体能够保护后代雏鸡对抗鸡球虫的感染，可通过免疫母鸡预防后代雏鸡的球虫病。

为实现上述目的，本发明提供了一种鸡球虫多价重组蛋白疫苗，该鸡球虫多价重组蛋白疫苗包含4种鸡球虫重组蛋白：柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白41(EtROP41)、柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白22(EtGAM22)、巨型艾美耳球虫配子体蛋白56(EmGAM56)、和堆型艾美耳球虫裂殖子蛋白Ea3-1E，所述4种鸡球虫重组蛋白均为原核表达，依次具有如SEQ ID NO.1-4所示的氨基酸序列，并按照1:1:1:1的质量比例混合。