[发明专利]核酸提取组合物及其应用，含有该核酸提取组合物的试剂、试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及核酸提取组合物及其应用，含有该核酸提取组合物的试剂、试剂盒。本发明提供了一套不含挥发性有机溶剂的核酸提取纯化试剂，解决了含有挥发性有机溶剂对人体的危害性，使得操作变得极其简单，大大的提升了核酸提取纯化的时效性，最快可以在10分钟内获得核酸，获得的核酸可用于PCR、NASBA、LAMP、RPA等生物反应，且本发明的试剂可以从血液、咽拭子保存液、唾液、尿液、痰液、粪便等多种复杂样本中获取细胞、细菌、真菌、DNA病毒、RNA病毒的核酸，非常适宜临床应用及科研应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及核酸提取组合物及其应用，含有该核酸提取组合物的试剂、试剂盒。

背景技术

核酸提取技术是完成所有分子反应的第一步，该步骤完成的优劣直接影响后续生物反应能否成功。核酸的提取与纯化技术是分子生物学实验的一项基本技术，从最初的目的基因提取到PCR产物纯化或“胶回收”、以及基因克隆中质粒的提取等实验过程，都离不开核酸提取纯化。核酸分离纯化技术起源于20世纪50年代，在70年代和80年代中传统的核酸沉淀溶解分离纯化方法得到了普遍的应用和推广。

常用的核酸提取纯化技术有Trizol法、离心柱法、磁珠法等方法，目前针对于这些方法所用到的核酸提取试剂均含有易挥发性有机溶剂。Trizol法利用DNA、RNA、蛋白质在有机层和水相层分布位置的不同而分离蛋白质与核酸，在获得核酸的过程中会用到苯酚、氯仿异戊醇、异丙醇、乙醇等对人体有害的挥发性有机溶剂，对操作人员存在较大的健康危害且Trizol法提取核酸步骤繁琐，对不同的样本提取效果重复性不佳，从样本裂解到获得核酸至少需要1.5h；因Trizol的有害性、操作繁琐、耗时长、与芯片不兼容等缺点，不宜在临床检测使用。常规的离心吸附柱及磁珠法提取核酸时也需要用乙醇或异丙醇进行结合，清洗时需要加入乙醇；这种加入醇类的方式使得核酸提取试剂在使用时操作相对复杂，耗时较长，且加入醇的试剂不能长时间保存，乙醇去除不干净还会一直后续反应且含乙醇的提取纯化试剂不适宜在微流控芯片上使用。

因此，提供一套无需添加任何挥发性有机溶剂的提取试剂成分及其使用方法，快速高效的对多种样本中的总核酸进行提取纯化具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了核酸提取组合物及其应用，含有该核酸提取组合物的试剂、试剂盒。本发明提供了一套无需添加任何挥发性有机溶剂的提取试剂成分及其使用方法，可快速高效的对多种样本中的总核酸进行提取纯化。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了核酸提取组合物，包括结合液和清洗液；所述结合液包括糖原、MOPS、多胺类物质和TCEP的组合物；所述清洗液包括盐酸胍、醋酸钾、糖原、MOPS、多胺类物质的组合物。

在本发明的一些具体实施方案中，所述结合液中糖原浓度为0.1%~1%（m/v）；MOPS浓度为10mM~20mM；多胺类物质包括精胺、亚精胺、丁二胺中的一种或两者以上的组合物，浓度为0.1%~2%（m/v）；TCEP浓度为5mM~50mM；

所述结合液的pH为8.5~10。优选的，用硫酸氢钠调节溶液pH至8.5~10。

在本发明的一些具体实施方案中，所述清洗液中盐酸胍浓度为0.05M~0.6M；醋酸钾浓度为0.05M~0.5M；糖原浓度为0.01%~0.1%（m/v）；MOPS浓度为1mM~2mM；多胺类物质包括精胺、亚精胺、丁二胺中的一种或两者以上的组合物，浓度为0.01%~0.3%（m/v）；

所述清洗液的pH为5~6。优选的，用硫酸氢钠调节溶液pH至5~6。

在本发明的一些具体实施方案中，所述核酸提取组合物还包括裂解液、加强剂、洗脱液中的一种或多种；

所述裂解液包括异硫氰酸胍、TritonX-100中的一种或两者的混合物；