[发明专利]基于免疫比浊和余辉发光的均相联合检测试剂和检测方法

说明书

本发明涉及一种均相联合检测试剂组合物，其包括浊度试剂I和发光试剂II，其中所述浊度试剂I包含连接有能与比浊生物标志物特异性结合的对应物的载体微球，所述浊度试剂I与比浊生物标志物发生免疫反应而使浊度增加；而所述发光试剂II包含：供体组分II‑1，其包含连接有能与余辉生物标志物特异性结合的对应物的供体微球，所述供体微球在光激发下产生单线态氧，和受体组分II‑2，其包含连接有能与余辉生物标志物特异性结合的对应物的受体微球，所述受体微球与单线态氧反应产生余辉发光信号。此外，本发明还涉及一种均相联合检测方法和包含所述试剂组合物的试剂盒。

发明领域

本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种基于免疫比浊和余辉发光的均相联合检测试剂组合物、试剂盒和相应的检测方法。

发明背景

体外诊断是现今用于诊断各种疾病的主要途径。除疾病诊断之外，体外诊断试剂更被用于个人健康水平的检测及预警。体外诊断试剂的涉及范围极广，包括了肝肾功能、心梗检测和炎症诊断等一系列项目。体外诊断多使用血液、尿液、唾液作为检测样本，以求达到快速、便捷、精准的诊断目的。

在体外诊断领域，免疫检测技术是重要的组成部分。免疫检测技术是一种利用抗原与抗体特异性反应而建立的检测方法。在临床诊断方面，免疫检测技术主要包括免疫比浊法、化学发光法、电化学发光法、时间分辨免疫荧光法和免疫层析法等。化学发光法和电化学发光法在操作上较为复杂，需要多步洗涤，因此出首诊报告的时间通常需要长达1-2小时。时间分辨免疫荧光法因涉及到溶解解离过程，也需要多步操作和洗涤，出首诊报告的时间也需要1-2小时。因此，化学发光法、电化学发光法、时间分辨免疫荧光法这3种方法都不是均相免洗体系，都需要多步操作，无法实现快速诊断。免疫层析法具有使用便捷、快速，适合用于口岸等床旁的即时检测，但免疫层析法需要使用试纸条作为载体，属于干式检测方法，其精准度较差，基质影响较大，检测通量难以提高。

免疫比浊法是最为普遍应用的检测方法之一，其优势在于均相反应，检测用时短、效率高，生产试剂成本较低，技术平台较为成熟等。同时，免疫比浊法的劣势也较为明显，主要体现在检测灵敏度不够，很多高灵敏项目的检测无法实现。均相免疫比浊法主要针对待测物含量在μg/mL以上级别的检测项目。

目前，对于待测物含量较低时，可选择例如均相发光免疫检测的方法，这是一类具有较高灵敏度的均相免疫检测方法。均相发光免疫检测法是一种基于微球与微球、粒子与粒子、或分子与分子之间靠近的效应，并用于待测样本中目标分析物检测的方法，例如均相FRET、均相化学发光等。通过对光信号的强度检测，来判断实际检测样本中有无待测目标分析物或进一步得到目标分析物的浓度信息。

随着科技的进一步发展，体外检测如今呈现套餐化，希望通过一次取样检测多个免疫指标能够更加精准对疾病做出判断。因此，多个项目联检大大提高了检测效率。但是，由于不同待测物在样本中的含量不同，不同项目的检验灵敏度和线性范围技术要求也不同。因此，一次采取样本进行多项目联检是个挑战。

已经有报道可以将光激化学发光法用于多项目联检，其通过调节不同能量供受体的组合以产生不同波长的发光信号，从而同时检测样本中多个待测物含量。但是，这种基于均相化学发光的均相发光免疫检测方法是在波长维度上对发光信号进行区分，由于被检测的两个发光波长可能存在着光谱重叠的现象，导致两个检测项目的发光信号存在互相干扰，所以可能导致假阳性和假阴性的结果，严重影响检测的准确性。

另外，在检测中经常涉及到多种待测物指标。由于这些待测物在体内的浓度含量存在巨大差异，难以使用一种方法同时对它们进行准确的检测。例如在炎症的诊断和鉴别中，C反应蛋白(CRP)是mg级含量水平的物质，降钙素原(PCT)是pg级含量水平的物质，如此明显的浓度差异会导致所对应检测信号强度的巨大差异，弱信号会被强信号掩盖或被严重干扰。因此，单次取样难以完成这两种项目的准确检测。