[发明专利]一种利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法

权利要求书

1.一种利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

反应管的待测样本加入蛋白酶K，加入裂解液和提取磁珠混匀后反应；反应后的反应管置于磁性环境下吸附磁珠，加入清洗液，取出反应管混匀，重悬磁珠，于磁性环境下吸附磁珠，移除液体；干燥后洗脱液重悬磁珠；

加入等温扩增反应液和生物素修饰引物，等温扩增获得生物素修饰的靶向的扩增产物；

所述扩增产物中加入亲和素修饰的扩增子靶向富集磁珠和FAM-DNA-NH2-荧光探针磁珠，孵育后形成扩增子磁珠，置于磁性环境下吸附磁珠，弃上清液，室温静置干燥磁珠得到混合磁珠；

所述混合磁珠加入Cas12a+crRNA预混液，重悬，反应后于磁性环境下吸附磁珠，扩增子磁珠上携带的靶标DNA序列与Cas12a+crRNA复合物结合，激活Cas12a非特异性切割活性，激活的Cas12a可使固定于DNA-FAM荧光探针磁珠的DNA-FAM被切断，FAM释放游离到液相，蓝光下观察；

其中所述亲和素修饰的扩增子靶向富集磁珠和FAM-DNA-NH2-荧光探针磁珠重量比为1:1。

2.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述待测样本加入蛋白酶K具体为：

EP管中加入待测样本溶解液补齐至预定体积，加入蛋白酶K。

3.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于所述，加入裂解液和提取磁珠摇匀，室温静置5-10min。

4.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述加入等温扩增反应液和生物素修饰引物，混匀后在37℃～40℃下静置20min。

5.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述孵育时间为10min。

6.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述Cas12a为含特异性RNA切割酶Cas12a。

7.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述crRNA为靶向RNA序列。

8.根据权利要求1所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述加入Cas12a+crRNA预混液，重悬，等待10min后置于磁性环境下吸附磁珠。

9.根据权利要求2所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，EP管中加入待测样本溶解液补齐至0.2ml。

10.根据权利要求1～9任一项所述利用复合磁珠实现核酸可视化检验方法，其特征在于，所述磁性环境和非磁性环境的转换通过以下装置实现，所述装置包括：

装置主体，所述装置主体内补设置有反应管安装槽；

温控组件，所述温控组件位于所述装置主体内部，用于控制反应管的温度；

磁珠分离件，所述磁珠分离件设置有磁性件，通过移动磁珠分离件的位置实现反应管中磁珠的集合与释放；

荧光可视化组件，所述荧光可视化组件包括位于所述装置主体中所述反应管安装槽底部的蓝色LED光源，以及，位于所述装置主体侧部用于观察滤光的橙色滤光片。