[发明专利]一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测引物组合物及试剂盒

说明书

本发明提供一种新型冠状病毒2019‑nCoV核酸检测引物组合物及试剂盒，包括：核酸提取试剂、核酸扩增反应液、酶混合液、阴性对照和阳性对照，所述核酸扩增反应液包括无核酸酶水、2×PCR Buffer Mix、MgCl₂、dNTPs、ORFab1基因引物探针、N基因的引物探针和内标基因HBB的引物探针。本发明采用荧光PCR技术，以新型冠状病毒(2019‑nCOV)ORF1ab1基因和N基因作为检测目标，反转录与核酸扩增一步完成，病毒核酸提取方便快捷，能实现对低至10拷贝的病毒核酸检测。

技术领域

本发明涉及一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测引物组合物试剂盒，属于体外诊断试剂领域。

背景技术

冠状病毒是一类具有囊膜，基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒，直径约80-120nm。新型冠状病毒 (2019-nCoV)经确认为新的变种，可引起病毒性肺炎、呼吸困难等症状，属于RNA病毒。

目前临床上检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的技术主要有影像学技术、荧光PCR法、测序法以及血清检测。影像学检测检测通量低，对于早期感染者以及轻症状患者无法及时确诊；测序法步骤繁琐、周期长且成本较高，血清检测灵敏度低，对于早期感染者无法及时确诊。荧光PCR 法具有灵敏度高、特异性好、经济方便等优点。荧光PCR法是目前临床上最主要的确诊技术，但是由于目前各家产品性能不一，检测灵敏度不能满足临床需求，假阴性率高。当前迫切需要开发一款准确性高，灵敏度高、特异性强方便快捷的试剂盒用于抗击疫情的一线。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测引物组合物和试剂盒。解决临床上检测时间长、假阴性率高的问题。并实现快速提取病毒核酸RNA、反转录与核酸扩增一步完成，以实现快速、有效、准确检测新型冠状病毒(2019-nCOV)。

本发明采用了如下技术方案：

本发明提供一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测的引物组合物，其特征在于，包括：

新型冠状病毒2019-nCOV ORFab1基因的引物和探针：

2019-nCOV ORFab1基因上游引物ORF-F：ATAGTGGGTGATGTTGATC GAGAG；

2019-nCOV ORFab1基因下游引物ORF-R：ACTGTCCTCAAAGCTGTC GCT；

2019-nCOV ORFab1基因探针ORF-P：CACTAGCCTTATTAGTAGGTATAG CCATAGC；

其中5′端标记FAM荧光报告基团，3′端标记BHQ1荧光淬灭基团；

新型冠状病毒2019-nCOV的N基因的引物和探针：

2019-nCOV N基因上游引物NF：CTCCTGCTATCAATCCTGCTAT；

2019-nCOV N基因下游引物NR：CTGCAGTTGAATATCTTGAACTGAT；

2019-nCOV N基因探针NP：TTGACTGCGGCCTCTCCTCGCTT；

其中5′端标记ROX荧光报告基团，3′端标记BHQ2荧光淬灭基团。

本发明还提供一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，其特征在于，包括：

核酸提取试剂、核酸扩增反应液、酶混合液、阴性对照和阳性对照，

所述核酸扩增反应液包括无核酸酶水、2×PCR Buffer Mix、MgCl₂、 dNTPs、ORFab1基因引物探针、N基因的引物探针和内标基因HBB的引物探针，