[发明专利]一种用于检测Cas3蛋白活性的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测Cas3蛋白活性的试剂盒，其特征在于，包括：

(1)固定于反应器皿上的亲和素；

(2)双链DNA；所述双链DNA中含有可被Cas3识别的不互补区域；所述双联DNA的两端分别被荧光基团和生物素标记；

通过所述生物素与所述亲和素的结合作用，可将所述双链DNA的一端固定于所述反应器皿上。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在所述双链DNA中，不互补区域的长度为9～11nt，优选为10nt。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，在所述双链DNA中，两条单链的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为FAM；

和/或，所述亲和素为链霉亲和素。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的20μL反应体系中含有：

浓度为0.8～1.2mg/μL的Cas3蛋白液2μL；

浓度为1μM的双链DNA溶液2μL；

反应液2μL；在所述反应液中含有200mM Tris，3M NaCl，50mM MgCl2；

余量为水。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的20μL反应体系中还含有抑制剂2μL；优选所述抑制剂的浓度不高于2mM。

7.权利要求1～5中任一项所述的试剂盒在检测Cas3蛋白活性方面的应用。

8.一种检测Cas3蛋白活性的方法，其特征在于，使用权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，具体步骤包括：

(1)在所述反应器皿中加入双链DNA、Cas3蛋白液和反应液，在36～38℃下进行孵育；

优选20μL反应体系中含有：

浓度为0.8～1.2mg/μL的Cas3蛋白液2μL；

浓度为1μM的双链DNA溶液2μL；

反应液2μL；在所述反应液中含有200mM Tris，3M NaCl，50mM MgCl2；

余量为水；

(2)在孵育结束后，清洗所述反应器皿，而后进行荧光信号的检测。

9.权利要求1～6中任一项所述的试剂盒在筛选Cas3蛋白的抑制剂方面的应用。

10.一种筛选Cas3蛋白的抑制剂的方法，其特征在于，使用权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，具体步骤包括：

(1)在所述反应器皿中加入双链DNA、Cas3蛋白液、抑制剂和反应液，在36～38℃下进行孵育；

优选20μL反应体系中含有：

浓度为0.8～1.2mg/μL的Cas3蛋白液2μL；

浓度为1μM的双链DNA溶液2μL；

反应液2μL；在所述反应液中含有200mM Tris，3M NaCl，50mM MgCl2；

抑制剂2μL；优选所述抑制剂的浓度不高于2mM；

余量为水；

(2)在孵育结束后，清洗所述反应器皿，而后进行荧光信号的检测。