[发明专利]FFPE参考品、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种FFPE参考品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

选择目标细胞系；

对所述目标细胞系的细胞培养至预定浓度后，收集细胞进行福尔马林固定，制成石蜡块；

对所述石蜡块进行切片，得到所述FFPE参考品。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述FFPE参考品为FFPE阴性参考品，所述目标细胞系为野生型细胞系，优选所述野生型细胞系选自BEAS-2B细胞、GM12878细胞及Hela细胞中的任意一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述预定浓度为4×10⁶～5×10⁶cells/mL浓度。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述FFPE参考品为FFPE阳性参考品，所述目标细胞系为野生型细胞系和突变型细胞系，

优选所述野生型细胞系选自BEAS-2B细胞、GM12878细胞及Hela细胞.中的任意一种或多种；

优选所述突变型细胞系选自SW48、H1650、KYSE450及H1975中的任意一种或多种。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，对所述目标细胞系的细胞培养至预定浓度后，收集细胞进行福尔马林固定，制成石蜡块包括：

对所述野生型细胞系和突变型细胞系的细胞分别进行稀释，得到稀释野生型细胞和稀释突变型细胞；

对所述稀释野生型细胞和所述稀释突变型细胞分别培养至所述预定浓度；

对达到所述预定浓度的所述野生型细胞和所述突变型细胞进行混合，得到混合细胞；

收集所述混合细胞进行福尔马林固定，从而制得所述石蜡块。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述稀释野生型细胞和所述稀释突变型细胞的浓度各自独立地为0.5×10³～5×10³cells/mL；

优选地，所述预定浓度为1.5×10⁶～5×10⁶cells/mL，更优选为2×10⁶～3×10⁶cells/mL；

优选地，所述野生型细胞和所述突变型细胞按设定突变频率进行混合。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，选择目标细胞系之前，还包括对所述目标细胞系的基因变异情况进行验证的步骤，优选采用NGS或ddPCR的方法验证。

8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，对所述石蜡块进行切片，得到厚度为8～12μm厚的石蜡卷，所述石蜡卷即为所述FFPE参考品。

9.一种FFPE参考品，其特征在于，所述FFPE参考品为石蜡包埋切片。

10.根据权利要求9所述的FFPE参考品，其特征在于，所述石蜡包埋切片为细胞石蜡包埋切片；

优选地，所述石蜡包埋切片的厚度为8～12μm；

优选地，所述FFPE参考品为FFPE阴性参考品，所述石蜡包埋切片为野生型细胞的石蜡包埋切片；

优选地，所述FFPE参考品为FFPE阳性参考品，所述石蜡包埋切片为野生型细胞与突变型细胞混合的石蜡包埋切片。

11.一种FFPE样本检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求9或10所述的FFPE参考品，或者权利要求1至8中任一项所述的制备方法所制备的FFPE参考品。

12.权利要求1至8中任一项所述的制备方法所制备的FFPE参考品，或者权利要求9或10所述的FFPE参考品在FFPE样本变异检测产品开发中的应用。