[发明专利]FFPE参考品、其制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种FFPE参考品、其制备方法及应用。该FFPE参考品的制备方法包括：选择目标细胞系；对目标细胞系的细胞培养至预定浓度后，收集细胞进行福尔马林固定，制成石蜡块；对石蜡块进行切片，得到FFPE参考品。通过选择合适的细胞系，然后进行培养后制备成与临床样本一样的FFPE样本，从而能够为临床FFPE样本提供从核酸提取到检测结果参考比对作用，为FFPE样本检测的整个流程起到质控作用，从而提高检测结果的准确性。适合大批量制备含有特定基因突变比例的肿瘤细胞株FFPE参考品，从而解决了企业在制备试剂盒等产品研发和临床检验时，内部质控无全流程的FFPE参考品的难题。

技术领域

本发明涉及FFPE样本检测领域，具体而言，涉及一种FFPE参考品、其制备方法及应用。

背景技术

近年来，随着分子生物学技术的不断发展，尤其是PCR技术和高通量测序技术的广泛应用，基因检测技术逐渐从实验室走向临床应用，特别是癌症治疗方面，大多数靶向药物的都与特定的基因突变类型有关，因此，在基因检测产品的研制和分析性能验证过程中，都需要含有特定基因不同突变频率的企业参考品，来评价产品的敏感性、准确性、特异性和重复性。同时，第三方临床检验所在进行基因检测过程中，也需要某些基因特定突变频率的参考品，来考核从核酸提取到检测结果的准确性。

在临床研究中常用的组织样本为经福尔马林固定且石蜡包埋(FFPE)的组织样本，然而，目前常见的企业参考品制备的形式为：(1)突变型质粒DNA与野生型质粒DNA混合；(2)突变型质粒DNA与野生型细胞系DNA混合；(3)突变型细胞系DNA与野生型细胞系DNA混合；(4)突变型临床样本DNA与野生型细胞系DNA混合。这些参考品的制备多是采用DNA混合而成，不能很好的模拟FFPE真实样本的情况，因而也难以提供起到准确的参考作用。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种FFPE参考品、其制备方法及应用，以解决现有技术中的FFPE参考品并不能起到准确的参考作用的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种FFPE参考品的制备方法，该制备方法包括：选择目标细胞系；对目标细胞系的细胞培养至预定浓度后，收集细胞进行福尔马林固定，制成石蜡块；对石蜡块进行切片，得到FFPE参考品。

进一步地，FFPE参考品为FFPE阴性参考品，目标细胞系为野生型细胞系，优选野生型细胞系选自BEAS-2B细胞、GM12878细胞及Hela细胞中的任意一种或多种。

进一步地，预定浓度为4×10⁶～5×10⁶cells/mL浓度。

进一步地，FFPE参考品为FFPE阳性参考品，目标细胞系为野生型细胞系和突变型细胞系，优选野生型细胞系选自BEAS-2B细胞、GM12878细胞及Hela细胞.中的任意一种或多种；优选突变型细胞系选自SW48、H1650、KYSE450及H1975中的任意一种或多种。

进一步地，对目标细胞系的细胞培养至预定浓度后，收集细胞进行福尔马林固定，制成石蜡块包括：对野生型细胞系和突变型细胞系的细胞分别进行稀释，得到稀释野生型细胞和稀释突变型细胞；对稀释野生型细胞和稀释突变型细胞分别培养至预定浓度；对达到预定浓度的野生型细胞和突变型细胞进行混合，得到混合细胞；收集混合细胞进行福尔马林固定，从而制得石蜡块。

进一步地，稀释野生型细胞和稀释突变型细胞的浓度各自独立地为0.5×10³～5×10³cells/mL；优选地，预定浓度为1.5×10⁶～5×10⁶cells/mL，更优选为2×10⁶～3×10⁶cells/mL；优选地，野生型细胞和突变型细胞按设定突变频率进行混合。

进一步地，选择目标细胞系之前，还包括对目标细胞系的基因变异情况进行验证的步骤，优选采用NGS或ddPCR的方法验证。