[发明专利]鸡沙门菌SifA蛋白在制备用于检测鸡沙门菌抗体的ELISA抗体检测试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了一种鸡沙门菌SifA蛋白在制备用于检测鸡沙门菌抗体的ELISA抗体检测试剂盒中的应用，本发明表达并纯化了鸡沙门菌SifA蛋白作为ELISA的包被抗原，对试剂盒工作程序进行了优化，用SPF鸡制备了鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、波氏杆菌和副鸡禽杆菌的标准阳性血清，用健康SPF鸡制备了标准阴性血清，并用该试剂盒检测所制备的阳性血清和阴性血清，证明其具有良好的特异性。本发明的试剂盒检测了大批量临床血清，并与临床上检测沙门菌常用的玻板凝集试验进行了比较，证明了该试剂盒的实用性。该试剂盒可用于鸡沙门菌感染后抗体的检测，为鸡沙门菌病提供一种快速准确的抗体检测方法。

技术领域

本发明涉及生物技术和动物细菌学检测技术领域，具体涉及一种鸡沙门菌SifA蛋白在制备用于检测鸡沙门菌抗体的ELISA抗体检测试剂盒中的应用。

背景技术

沙门菌是世界卫生组织法定报告的人兽共患病原菌之一，在我国被列为二类传染病，给畜牧业生产和人类健康造成了重大威胁(罗薇，黄翠颖，王凡，刘博闻，潘志明，耿士忠，焦新安.某规模化种鸡场沙门菌流行现状调查、耐药性分析及分子分型[C].中国畜牧兽医学会.中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集.中国畜牧兽医学会:中国畜牧兽医学会，2018:114.)。沙门菌是食源性致病菌之一，沙门菌可通过被污染的蛋类或肉制品等导致人患上沙门菌病，出现腹泻、呕吐、发热、败血症等症状，严重危害食品安全和公共卫生(李卓阳，郭荣显，孟闯，张云增，耿士忠，焦新安，潘志明.肠炎沙门菌与鸡蛋：污染机制、危害分析及生物防控[J].中国家禽，2018，40(17):40–44)。沙门菌对养鸡业所造成的危害十分突出，可造成严重的经济损失，成年鸡感染可能会出现腹泻、食欲不振、产蛋率下降、孵化率下降等非典型的症状，有的鸡也可呈隐性感染状态不被发现，既可水平传播也可垂直传播，在感染过程中幸存下来的鸡可能成为沙门菌的传染源(Eriksson H,R,Ernholm L,Melin L,Jansson D S.Diagnostics,epidemiological observations and genomic subtyping in an outbreak of pullorumdisease in non-commercial chickens[J].Vet Microbiol,2018,217:47–52)。沙门菌在鸡群中高水平的感染和持续存在，需要建立一种高效、特异、灵敏、稳定的检测方法，以便能够及时检测到该病的发生，对其进行防治。

在沙门菌病的检测方法中，基于病原的检测方法需要考虑沙门菌的间歇性排毒，样品的采集费时费力并且样品在采集或运输过程中容易污染(王杰，陈颖钰，彭清洁，郭爱珍.沙门菌检测方法研究进展[J].动物医学进展,2016,37:94–98)。而基于血清抗体的检测方法不用考虑感染动物是否处于排毒期，采集的全血或血清不容易污染，且检测方法更方便。鸡沙门菌血清抗体检测被OIE推荐使用的方法是玻板凝集试验，并在欧洲等国家的鸡白痢净化中起到了重要作用(世界动物卫生组织.陆生动物诊断试验及疫苗手册[M].北京：中国农业出版社，2012:514–529)。

目前，玻板凝集试验为我国养鸡场净化鸡白痢沙门菌常用的检测方法，其抗原系用标准型和变异型鸡白痢、鸡伤寒沙门菌，经适宜培养基培养，收获菌体，经灭活，乙醇处理后加入结晶紫和甘油等制成(参照北京中海生物科技有限公司，鸡白痢鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原说明书)。由于玻板凝集试验的抗原为多价抗原，所以特异性并不是很强。该方法虽然操作简单，成本低，不需要专业人员操作，可现场操作，但是敏感性和特异性低，主观性强并且不同生产厂家或者同一生产厂家不同批次检测结果有差异(顾小雪，刘洋，霍斯琪，刘玉良，韩雪，张倩，翟新验，王传彬.鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂的比较与评估.中国兽医学报，2018，38:108–112)。