[发明专利]一种Cas6蛋白功能活性的检测方法及其应用在审
| 申请号： | 202010352191.3 | 申请日： | 2020-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN111394423A | 公开（公告）日： | 2020-07-10 |
| 发明（设计）人： | 岑山;田东芳;张永欣 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/44 | 分类号： | C12Q1/44 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 陈征 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cas6 蛋白 功能 活性 检测 方法 及其 应用 | ||
1.一种Cas6蛋白功能活性的检测方法，所述Cas6蛋白来源于I-F型CRISPR系统的绿脓杆菌，其特征在于，包括：
(1)在RNA的两端分别标记荧光基团和猝灭基团，获得底物；所述RNA由CRISPR位点中的一个重复序列在一端连接一个间隔序列组成，所述CRISPR位点来源于所述绿脓杆菌的I-F型CRISPR系统；
(2)将所述底物与所述Cas6蛋白反应后，检测荧光信号。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)的反应体系为：所述Cas6蛋白的溶液2μL，1μM的所述底物的溶液2μL，反应液2μL，水14μL；所述反应液中HEPES的浓度为200mM、KCl的浓度为1M，所述Cas6蛋白的溶液中所述Cas6蛋白的浓度为0.8-1.2mg/μL，Tris-HCl的浓度为20mM，NaCl的浓度为500mM，甘油的体积浓度为40％。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)的反应时间为5-15min，反应温度为室温。
4.一种检测Cas6蛋白功能活性的试剂盒，其特征在于，包括来源于I-F型CRISPR系统的绿脓杆菌的Cas6蛋白和底物；所述底物为两端分别标记有荧光基团和猝灭基团的RNA，所述RNA由CRISPR位点中的一个重复序列在一端连接一个间隔序列组成，所述CRISPR位点来源于所述绿脓杆菌的I-F型CRISPR系统。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的20μL反应体系中包括：所述Cas6蛋白的溶液2μL，1μM的所述底物的溶液2μL，反应液2μL，余量为水；所述反应液中HEPES的浓度为200mM、KCl的浓度为1M，所述Cas6蛋白的溶液中所述Cas6蛋白的浓度为0.8-1.2mg/μL，Tris-HCl的浓度为20mM，NaCl的浓度为500mM，甘油的体积浓度为40％。
6.权利要求1-3任一项所述的检测方法或权利要求4或5所述的试剂盒在筛选所述Cas6蛋白的抑制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在进行所述底物与所述Cas6蛋白反应的同时加入待筛选抑制剂一同反应。
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