[发明专利]一种重组大肠杆菌产indigoidine培养基及发酵和制备色素粗品方法

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌产indigoidine培养基，其特征在于，按1L体积计算，由如下重量的原料组成：

胰蛋白胨5g，酵母浸粉10g，氯化钠10g，3-(N-吗啉)丙磺酸5g，剩余为水。

2.根据权利要求1所述培养基，其特征在于：所述重组大肠杆菌产indigoidine培养基pH＝7.0～7.5。

3.利用如权利要求1所述一种重组大肠杆菌产indigoidine培养基进行发酵培养的方法，其特征在于，以1％(V/V)接种量将种子液转接于权利1所述的培养基中，发酵过程前期37℃培养6～8h，后期28℃培养10～12h，发酵终止，整个发酵过程摇床转速为180r/min。

4.一种重组大肠杆菌产indigoidine色素粗品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：取50mL发酵液于EP管中，12000r/min离心20min，弃上清，留沉淀。

步骤2：向步骤1中的沉淀加入5mL甲醇，振荡悬浮，12000r/min离心10min，弃上清，此过程重复2次；然后分别用乙酸乙酯、正己烷采用上述方法清洗沉淀2次。

步骤3：向步骤2中所得沉淀加入20mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，振荡混匀，超声溶解沉淀中的色素，至溶液颜色不再加深，12000r/min离心20min，上清溶液经0.22μm有机微孔滤膜过滤，即为色素溶液。

步骤4：将步骤3中的色素溶液经旋转蒸发去除DMF，在水浴温度65～72℃，蒸发瓶转速50～60r/min，真空度-0.1MPa的条件下，旋蒸至蒸发瓶内产生蓝黑色固态物质并无流动液体时结束。

步骤5：取1mL超纯水加入步骤4中的旋蒸瓶内，超声悬浮蓝黑色固态物质，转移至EP管中，于-80℃下冻存24h，然后放入真空冷冻干燥机中冻干14～18h，此时EP管中蓝黑色固体完全变干，即为干燥的indigoidine色素粗品。