[发明专利]一种美拉诺坦I的固相合成法

说明书

本发明公开了一种美拉诺坦I的固相合成方法，包括以下步骤：选取替代度为0.40‑0.80mmol/g的Ramage Amide AM resin树脂，偶联Fmoc‑Val‑OH得到Fmoc‑Val‑氨基树脂；在Fmoc‑Val‑氨基树脂上按照序列依次偶联，最后一步用Ac‑Ser(tbu)‑OH；裂解合成好的树脂多肽得到美拉诺坦I的粗品肽；最后溶解样品后，通过高效液相色谱分离纯化收集合格肽液体，冻干后得到美拉诺坦I精品。本发明使用的合成方法能够有效地提高产品收率，降低“三废”的排放，适合大规模生产。

技术领域

本发明涉及化工技术领域，尤其涉及一种美拉诺坦I的固相合成法。

背景技术

随着美拉诺坦I的上市，这条由13个氨基酸组成的线性多肽在药物研究方面势必将发挥出更大的作用。美拉诺坦I的主要英文名有Melanotan-1、 Afamelanotide，属于α-MSH类似物，美拉诺坦I可以用来治疗红细胞生成性原卟啉症导致的光敏性疾病。美拉诺坦Ⅰ的分子式是C78H111N21O19，分子量1646.85，具体序列如下：Ac-SYS{Nle}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2，序列结构式为：

传统的固相合成中，树脂的选择会对产品的偶联率以及最终的纯度产生很大的影响。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，本发明提供一种合成效率高、成本低且收率较高的美拉诺坦I的固相合成方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种美拉诺坦I的固相合成方法，包括以下步骤：选取替代度为0.40-0.80mmol/g(优选为0.40-0.60mmol/g) 的RamageAmide AM resin树脂，偶联Fmoc-Val-OH得到Fmoc-Val-氨基树脂；采用Fmoc固相合成法，向载体树脂上按照美拉诺坦I的序列依次偶联氨基酸，所述的氨基酸采用Fmoc基团保护，最后一个氨基酸为Ac-Ser(tBu)-OH，最终合成得到侧链全保护的美拉诺坦I-氨基树脂；依次偶联采用的缩合剂是缩合剂与有机碱，缩合剂包括PyBop、TBTU、HBTU、HATU或PyAop中的一个与DIEA组成的缩合剂；或是由HOBT、HOAT、Cl-HOBT中的一个或一个以上与DIC组成的缩合剂；将侧链权保护的美拉诺坦I-氨基树脂通过裂解液从固相载体上脱离，并脱除侧链保护基；用冰乙醚沉淀并洗涤得到美拉诺坦I粗品肽；粗品肽通过高效液相色谱纯化分离，冻干得到美拉诺坦I；从固相载体上脱离以及脱除侧链保护基的裂解液是三氟醋酸、三异丙基硅烷、乙二硫醇、苯酚、水组成的混合液。

进一步，固相合成中所使用的保护氨基酸采用Fmoc基团保护和乙酰基团保护，各种氨基酸分别以Fmoc-Val-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、 Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(tBu) -OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Ac-Ser(tBu)-OH的形式应用。

进一步，裂解液采用的试剂配方体积比例为TFA：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷：水＝(81-83)：(7-8)：(4-6)：(2-4)：(1-3)。

进一步，Ramage Amide AM resin树脂是下列树脂之一：

Ramage Amide AM resin树脂

Ramage Amide MBHA Resin树脂

Ramage AM Resin树脂

Rink Amide MBHA树脂