[发明专利]一种缺失HOF1基因的白念珠菌减毒菌株的应用在审

专利信息
申请号: 202010355906.0 申请日: 2020-04-29
公开(公告)号: CN111500516A 公开(公告)日: 2020-08-07
发明(设计)人: 冯金荣;姚双燕;庄重 申请(专利权)人: 南通大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12Q1/04;A61K45/00;A61P31/10;C12R1/725
代理公司: 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 代理人: 徐思波
地址: 226019 *** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 缺失 hof1 基因 念珠菌 菌株 应用
【权利要求书】:

1.一种白念珠菌减毒菌株,其特征在于,所述白念珠菌减毒菌株为HOF1基因不表达的白念珠菌hof1/hof1 缺失株。

2.根据权利要求1所述的一种白念珠菌减毒菌株,其特征在于,所述白念珠菌减毒菌株通过胞质分裂相关基因HOF1制得。

3.根据权利要求2所述的一种白念珠菌减毒菌株,其特征在于,所述白念珠菌减毒菌株可以通过RNA干扰或者基因重组的方法使HOF1基因不表达;或者通过制备HOF1蛋白拮抗剂,使HOF1基因表达的蛋白不发挥作用。

4.一种缺失HOF1基因的白念珠菌减毒菌株在制备或筛选白念珠菌治疗药物方面的应用。

5.根据权利要求4所述的一种缺失HOF1基因的白念珠菌减毒菌株在制备或筛选白念珠菌治疗药物方面的应用,其特征在于,所述白念珠菌治疗药物以HOF1基因为靶点,筛选或制备使HOF1基因不表达的药物。

6.根据权利要求4所述的一种缺失HOF1基因的白念珠菌减毒菌株在制备或筛选白念珠菌治疗药物方面的应用,其特征在于,所述白念珠菌治疗药物可以通过RNA干扰或者基因重组的方法使HOF1基因不表达制得;或者通过制备HOF1蛋白拮抗剂,使HOF1基因表达的蛋白不发挥作用的方法制得。

7.一种缺失HOF1基因的白念珠菌减毒菌株在毒力调控方面的应用。

8.根据权利要求7所述的一种缺失HOF1基因的白念珠菌减毒菌株在毒力调控方面的应用,其特征在于,包括以下步骤:

(1)检测HOF1基因缺失对白念珠菌在宿主细胞内存活的影响情况:进行白念珠菌与巨噬细胞共培养实验,将5×105巨噬细胞接种到12孔板中,于37℃、5%CO2中过夜培养,以1:1比例分别加入白念珠菌野生型菌株和HOF1缺失株,2h后洗去未结合的白念珠菌,其中部分巨噬细胞用0.01% SDS裂解后,适当稀释并涂布YPD平板;其余的细胞继续培养6h,用同样的方法裂解细胞并涂布平板;所有平板于30℃培养2天后统计菌落数,比较野生菌菌株和HOF1缺失株的生长情况;

(2)检测HOF1缺失的白念珠菌毒性情况:小鼠毒理实验,分别将1×106白念珠菌野生菌株和HOF1缺失株细胞注射Balb/c小鼠,观察存活率情况;同时,分别将2×106白念珠菌野生菌株和HOF1缺失株细胞注射Balb/c小鼠,并观察存活率;通过检测濒死小鼠肾脏切片,观察感染野生型菌株和HOF1缺失株的小鼠肾脏内是否有菌丝态细胞存在;

(3)检测HOF1基因对白念珠菌在内脏定植的影响;分别将2×106白念珠菌野生菌株和HOF1缺失株细胞注射3只五周龄的Balb/c小鼠,48h后取右肾,研磨匀浆后适当稀释涂布YPD平板,30℃培养2天后计数菌落数;检测感染野生型菌株的小鼠及感染HOF1缺失株的小鼠的肾脏含菌量。

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