[发明专利]一种耐硒细菌筛选方法及应用

权利要求书

1.一种耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，所述耐硒细菌的筛选方法包括以下步骤：

第一步，取制备的富硒土壤悬液加到亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基，并置于摇床上振荡培养；

第二步，将振荡培养后的菌液接种到亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床振荡培养；

第三步，将培养的菌液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床振荡培养；

第四步，将得到的菌液用无菌水稀释，取稀释菌液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，置于生化培养箱中恒温培养；

第五步，将长出的单菌落划线分离，之后置于生化培养箱中恒温培养，获得纯菌株；

第六步，取长出的菌落接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，之后置于摇床中振荡培养。

2.如权利要求1所述的耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，所述富硒土壤悬液的制备方法包括：称取10g富硒土壤样品，加入放置有10颗玻璃珠的已灭菌的去离子水的锥形瓶中，置于摇床中振荡，摇床的温度为28℃，转速为180r/min，振荡时间为30min，静置30min；

所述第一步取制备的富硒土壤悬液加到含浓度为100-200μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基，并置于摇床上振荡培养。

3.如权利要求2所述的耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，取制备的富硒土壤上清液，加入到放置有含浓度为100μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基的锥形瓶中，液体培养基的量为50ml，置于摇床中振荡培养，摇床温度为30℃，转速为180r/min，培养时间为18h。

4.如权利要求1所述的耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，所述第二步将振荡培养后的菌液接种到含浓度为100-200μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，菌液的接种量为牛肉膏蛋白胨液体培养基总体积的5％-10％，之后置于摇床振荡培养，重复3-5次。

5.如权利要求4所述的耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，将振荡培养后的菌液接种到有含浓度为100μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基的锥形瓶中，菌液接种量体积分数为5％，液体培养基的量为50ml，置于摇床中振荡培养，摇床温度为30℃，转速为180r/min，培养时间为18h，重复4次。

6.如权利要求1所述的耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，所述第三步将培养的菌液接种到含亚硒酸钠的量为0-20000μg/ml的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，菌液的接种量为牛肉膏蛋白胨液体培养基总体积的0.5％-2％，之后置于摇床振荡培养。

7.如权利要求6所述的耐硒细菌的筛选方法，其特征在于，将培养的菌液接种于放置有含亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基的锥形瓶中，接着将接种后的锥形瓶放置在摇床中培养，其中液体培养基中含亚硒酸钠的量为1，2000，5000，8000，10000，12000，15000，18000，20000，22000，25000μg/ml，菌液接种量体积分数为2％，液体培养基的量为50ml，置于摇床中振荡培养，摇床温度为30℃，转速为180r/min，培养时间为18h。