[发明专利]一种耐硒细菌筛选方法及应用

说明书

本发明属于细菌筛选技术领域，公开了一种耐硒细菌筛选方法及应用，取制备的富硒土壤悬液加到亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基，并置于摇床上振荡培养；将振荡培养后的菌液接种到亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床振荡培养；将培养的菌液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床振荡培养；将得到的菌液用无菌水稀释，取稀释菌液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，置于生化培养箱中恒温培养；将长出的单菌落划线分离，之后置于生化培养箱中恒温培养，获得纯菌株；取长出的菌落接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，之后置于摇床中振荡培养。本发明材料成本低、实验方法简单和对环境无污染。

技术领域

本发明属于细菌筛选技术领域，尤其涉及一种耐硒细菌筛选方法及应用。

背景技术

目前，在高硒区自然环境中寻找超耐硒并能还原硒的微生物方法：通过对湖北省恩施市新塘乡渔塘坝硒矿床带采集的10种检样分别进行富集、分离、筛选、纯化培养出具有超耐硒能力的菌株3株，经鉴定分别为鲍氏不动杆菌、地衣芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌。初步研究了这3株菌的培养特性、形态特征和生化学与分子生物学性状。结果地衣芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌在含硒量为33000μg/ml的营养琼脂培养基中能正常生长并能还原无机硒为红色单质硒，在含硒量为46500μg/ml时仍能缓慢生长。结论：超耐硒微生物的发现，在治理环境硒污染、富硒农产品开发等方面具有重要意义。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有耐硒细菌的筛选方法存在操作复杂，效率低。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种耐硒细菌筛选方法及应用。

本发明是这样实现的，一种耐硒细菌的筛选方法，所述耐硒细菌的筛选方法包括以下步骤：

第一步，取制备的富硒土壤悬液加到亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基，并置于摇床上振荡培养；

第二步，将振荡培养后的菌液接种到亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床振荡培养；

第三步，将培养的菌液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于摇床振荡培养；

第四步，将得到的菌液用无菌水稀释10²-10⁷，取稀释10⁵、10⁶、10⁷菌液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，置于生化培养箱中恒温培养；

第五步，将长出的单菌落划线分离，之后置于生化培养箱中恒温培养，获得纯菌株；

第六步，取长出的菌落接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，之后置于摇床中振荡培养。

进一步，所述富硒土壤悬液的制备方法包括：称取10g富硒土壤样品，加入放置有10颗玻璃珠的已灭菌的去离子水的锥形瓶中，置于摇床中振荡，摇床的温度为28℃，转速为180r/min，振荡时间为30min，静置30min；

所述第一步取制备的富硒土壤悬液加到含浓度为100-200μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基，并置于摇床上振荡培养。

进一步，取制备的富硒土壤上清液，加入到放置有含浓度为100μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基的锥形瓶中，液体培养基的量为50ml，置于摇床中振荡培养，摇床温度为30℃，转速为180r/min，培养时间为18h。

进一步，所述第二步将振荡培养后的菌液接种到含浓度为100-200μg/ml亚硒酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，菌液的接种量为牛肉膏蛋白胨液体培养基总体积的5％-10％，之后置于摇床振荡培养，重复3-5次。