[发明专利]一种提高多重PCR扩增文库质量的方法

权利要求书

1.一种提高多重PCR扩增文库质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）根据多重PCR中每个扩增子的扩增靶标序列，人工合成若干条差异靶标序列；

所述差异靶标序列的两端具有与所述扩增子的引物互补配对的片段；

2）所述差异靶标序列与所述扩增靶标序列的差异大小用编辑距离定义，编辑距离大于5的差异通过测序被区分；

所述编辑距离是指两段序列之间，由一段序列转成另一段所需要的最少编辑操作次数，所述编辑的形式包括插入、缺失和替换中一种或几种；

3）将步骤1）中若干条人工合成的差异靶标序列中，不少于扩增子总数量的10%进行混合，构建得到多重PCR人工合成带差异的序列集合；

4）以待测样本为反应模板，将所述多重PCR人工合成带差异的序列集合加入反应体系中进行多重PCR扩增反应，得到高质量的多重PCR扩增文库。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1）中多重PCR中扩增子是候选检测生物分别经多重PCR引物扩增得到的扩增产物。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1）中多重PCR中扩增子的数量根据候选检测生物的数量而决定。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1）中所述差异靶标序列中，以4种碱基数比例之和为100%计，4种碱基数量的比例均不大于70%。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2）中在多重PCR人工合成带差异的序列集合中，各带差异序列的靶标序列的拷贝数不大于10⁸拷贝/mL。