[发明专利]新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测引物和探针、试剂盒和方法在审
| 申请号： | 202010358735.7 | 申请日： | 2020-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN111500776A | 公开（公告）日： | 2020-08-07 |
| 发明（设计）人： | 唐乃平;龚剑;肖钢 | 申请（专利权）人： | 湖南润美基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 淮安市科文知识产权事务所 32223 | 代理人： | 谢观素 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市开福区沙坪街道中*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 新型 冠状病毒 2019 ncov 荧光 rpa 检测 引物 探针 试剂盒 方法 | ||
1. 一种新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测引物和探针，其特征在于，它包括如SEQID NO.1-2所示的新型冠状病毒2019-nCoV特异性引物和如SEQ ID NO.3所示的探针。
2.权利要求1所述的荧光RPA检测引物和探针在制备新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒中的应用。
3.一种新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1所述的荧光RPA检测引物和探针。
4. 根据权利要求3所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括如SEQ ID NO.4-5所示的内参基因RNase P特异性引物和如SEQ ID NO.6所示的内参基因RNase P特异性探针。
5.根据权利要求3或4所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括：
阳性对照：含新型冠状病毒2019-nCoV ORF1ab基因序列质粒；
阴性对照：RNase Free H2O。
6. 新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒的检测方法，其特征在于，以待测样品RNA为模板，配制扩增反应体系进行荧光RPA扩增得到扩增曲线，对所述扩增曲线进行分析，并作出判断；所述的扩增反应体系中包括权利要求1所述的新型冠状病毒2019- nCoV的荧光RPA检测引物和探针。
7. 根据权利要求6所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒检测方法，其特征在于：所述扩增反应体系包括：待测样品RNA模板、权利要求1所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测引物和探针、RPA Buffer、Enzyme Mix、激活剂。
8. 根据权利要求7所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒检测方法， 其特征在于：所述扩增反应体系还包括如SEQ ID NO.4-5所示的内参基因RNase P特异性引物和如SEQ ID NO.6所示的内参基因RNase P特异性探针。
9. 根据权利要求6所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒检测方法， 其特征在于：所述荧光RPA扩增的程序为：40℃ 20min，间隔30s采集一次荧光，计40个循环。
10.根据权利要求6所述的新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测试剂盒检测方法，其特征在于，对扩增曲线进行分析判断的原则为：
当FAM荧光通道中时间值≤19min时，判断样品为新型冠状病毒2019-nCoV阳性；
当FAM荧光通道中19min时间值≤20min，重复一次实验，如果时间值还是在此范围之内或小于等于19min就判断样品为新型冠状病毒2019-nCoV阳性，否则判断样品为新型冠状病毒2019-nCoV阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道时间值≤20min时，判断样品为新型冠状病毒2019-nCoV阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道也无扩增曲线时，判断本次实验异常，需要重新提取标本RNA和重新扩增。
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