[发明专利]一种基于荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于荧光RT‑PCR方法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒，包括微载体、引物对和探针；所述微载体具有与冠状病毒一一对应的编码信息，所述的引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述探针序列如SEQ ID NO：3所示。本发明还公开了一种检测新型冠状病毒的方法。本发明的试剂盒灵敏度高，特异性强；本发明的检测方法快速且准确率高。

技术领域

本发明涉及一种病毒的检测，特别是涉及一种基于荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒属于冠状病毒科、beta冠状病毒属，是2019年12月至2020年1月流行并被鉴定发现的一种新型冠状病毒。新型冠状病毒能致人疾病，能在人和动物之间传播，新型冠状病毒感染的症状有发热、喘息和肺炎等。

由于新型冠状病毒是2020年被鉴定发现的一种全新型冠状病毒，目前没有特异性的检测方法，而且这种病毒导致人呼吸道重症感染的情况比较常见，并有一定的传染性，确诊患者需要隔离治疗，故急切需要开发一种能够快速且准确对这种新型冠状病毒进行鉴定的分子方法，从而达到有效控制疫情流行传播，患者快速诊断隔离治疗的目的。

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是将RNA的反转录 (RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用，从 RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。 RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

为此，期待一种基于荧光RT—PCR检测技术检测新型冠状病毒的试剂盒和方法，能够有效解决现有技术中存在的缺陷。

发明内容

本发明的主要目的在于，克服现有的病毒检测中存在的检测速率慢且检测准确率低的缺陷，而提供一种基于荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒。本发明的试剂盒检测速度快且准确度高，具有广泛的应用前景。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明提供了一种基于荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒，包括微载体、引物对和探针；所述微载体具有与冠状病毒一一对应的编码信息，所述的引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述探针序列如SEQ ID NO：3所示。

在本发明的一些实施方案中，所述探针的核酸在5’端连接有荧光报告基团，在核酸的3’端连接有荧光淬灭基团，且两个探针的荧光报告基团不同。

在本发明的一些实施方案中，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX、CY3和 CY5中的任一种。

在本发明的一些实施方案中，所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2和 NFQ中的任一种。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒还包含PCR缓冲液以及Taq酶。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。

在本发明的一些实施方案中，所述阳性对照液为含有新型冠状病毒的扩增序列。

在本发明的一些实施方案中，所述阴性对照为RNase Free H₂O。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

本发明提供了一种新型冠状病毒的RT-PCR检测方法，该方法包括以下步骤：