[发明专利]用于检测TPMT基因多态性的引物组及其应用方法

权利要求书

1.用于检测TPMT基因多态性的引物组，其特征在于，包括下述三个引物对中的至少一个引物对：

用于检测TPMT基因的rs1800462位点的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

用于检测TPMT基因的rs1800460位点的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

用于检测TPMT基因的rs1142345位点的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.一种权利要求1所述的引物组在制备检测TPMT基因的rs1800462位点、rs1800460位点和rs1142345位点的试剂盒中应用。

3.一种权利要求1所述的用于检测TPMT基因多态性的引物组的应用方法，其特征在于，包括：

设计权利要求1所述的引物组；

从待测样本中提取基因组DNA作为扩增模板；

配制包含所述引物组和所述扩增模板的多重聚合酶链式反应PCR反应体系；

对所述多重PCR反应体系进行多重PCR扩增反应，得到PCR产物；

根据所述PCR产物，确定所述待测样本的TPMT基因的热点突变位点的基因突变情况。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述根据所述PCR产物，确定所述待测样本的TPMT基因的热点突变位点的基因突变情况，包括：

电泳检测所述PCR产物，获得所述PCR产物的扩增片段大小；

当所述PCR产物的扩增片段大小正确时，对所述PCR产物进行核苷酸序列测定，获得所述待测样本的TPMT基因的热点突变位点的基因突变情况。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，

所述多重PCR反应体系还包括：DNA聚合酶、所述DNA聚合酶对应的PCR缓冲液、4种脱氧核糖核苷三磷酸dNTP的混合物和双蒸水；

其中，DNA聚合酶的用量为0.5～5U，每种dNTP的终浓度为200～500μM，所述引物组中每条引物的终浓度为20～300nM，所述扩增模板的用量为10ng～2μg。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述DNA聚合酶，包括：Taq DNA聚合酶、KODDNA聚合酶或者PfuDNA聚合酶。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述PCR反应体系的反应条件包括：94～98℃，预变性2～10min；94～98℃，变性10～90s；55～68℃，退火10～90s；68～72℃，延伸0.5～6min；94～98℃变性10～90s、55～68℃退火10～90s和68～72℃延伸30～300s，循环25～40次，68～72℃，终延伸5～20min。

8.根据权利要求3至7任一所述的方法，其特征在于，

TPMT2、TPMT3B和TPMT3C的摩尔比为：

TPMT2：TPMT3B：TPMT3C＝(0.1-10)：(0.1-10)：(0.1-10)，其中，TPMT2为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对，TPMT3B为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对，TPMT3C为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物对。