[发明专利]一种用于肺病治疗的脐带间充质干细胞及其制备方法

权利要求书

1.间充质干细胞在制备用于治疗肺部疾病的药物中的应用，其特征在于，所述的肺部疾病为尘肺、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、重症新型冠状病毒肺炎、急性呼吸窘迫综合征或肺损伤；所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、骨髓间充质干细胞中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞包括分离自人脐带组织的原代细胞及其传代细胞。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞的总注射量为1×10⁶-36×10⁶个/kg体重。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞的制备方法为取健康足月妊娠剖宫产的胎儿脐带，采集后在12h内用组织块贴壁法进行分离培养，培养的具体步骤如下：

(1)沿脐静脉内腔纵向剪开血管，剥离脐静脉内膜，将剩余组织切成小块，转移至细胞培养瓶中，加入10mL完全培养基使其均匀分布，置于CO₂培养箱中；

(2)第7天全量换液，第12天半量换液，于培养的第14天计数集落数，超过50个细胞计为集落；当细胞达到70％-80％融合时，以含0.125％胰蛋白酶的0.1％EDTA消化传代细胞，以2.5×10³-5×10³个/cm²密度接种，记为第一代细胞，即P1；

(3)取P1代细胞以3-6×10³/cm²密度接种，再进行接种传代培养，添加完全培养基20mL至培养瓶，置于CO₂培养箱中，当细胞达到70％-80％融合时，以含0.125％胰蛋白酶的0.1％EDTA消化传代细胞，记为第二代细胞，即P2；

(4)依次制备培养第三到第八代次细胞，即P3-P8。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的步骤(1)中的完全培养基为含2％血清替代品的Lonza UltraCULTURE通用型无血清基础培养基或DMEM/F12基础培养基；所述的步骤(1)和步骤(3)中CO₂培养箱设置条件为37℃、5％CO₂、饱和湿度。

7.一种脐带间充质干细胞，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞取自健康足月妊娠剖宫产的胎儿脐带，采集后在12h内用组织块贴壁法进行分离培养，培养的具体步骤如下：

(1)沿脐静脉内腔纵向剪开血管，剥离脐静脉内膜，将剩余组织切成小块，转移至细胞培养瓶中，加入10mL完全培养基使其均匀分布，置于CO₂培养箱中；

(2)第7天全量换液，第12天半量换液，于培养的第14天计数集落数，超过50个细胞计为集落；当细胞达到70％-80％融合时，以含0.125％胰蛋白酶的0.1％EDTA消化传代细胞，以2.5×10³-5×10³/cm²密度接种，记为第一代细胞，即P1；

(3)取P1代细胞以3-6×10³/cm²密度接种，再进行接种传代培养，添加完全培养基20mL至培养瓶，置于CO₂培养箱中，当细胞达到70％-80％融合时，以含0.125％胰蛋白酶的0.1％EDTA消化传代细胞，记为第二代细胞，即P2；

(4)依次制备培养第三到第八代次细胞，即P3-P8。

8.一种治疗尘肺的药物，其特征在于，所述的药物中包含权利要求7所述的脐带间充质干细胞。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述的药物中还包括其他药学上可接受的载体，如：海藻糖、无水或含水的氯化钠、葡萄糖、蔗糖、木糖醇、果糖、甘油、山梨醇、甘露醇、氯化钾、甘露糖、氯化钙和氯化镁。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述的药物为注射液，所述的注射液的组成为：1×10⁵-25×10⁵个/mL间充质干细胞、0.01-0.05g/mL人血白蛋白、0.9％氯化钠注射液。