[发明专利]用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组及其应用方法

权利要求书

1.用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组，其特征在于，包括下述至少一个用于检测KRAS基因的引物对和用于检测BRAF基因的引物对：

用于检测KRAS基因第2号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

用于检测KRAS基因第3号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

用于检测BRAF基因第15号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.一种权利要求1所述的用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组的应用方法，其特征在于，包括：

设计权利要求1所述的引物组；

从待测样本中提取DNA作为扩增模板；

配制包含所述引物组和所述扩增模板的多重聚合酶链式反应PCR反应体系；

对所述多重PCR反应体系进行多重PCR扩增反应，得到PCR产物；

根据所述PCR产物，确定所述待测样本的KRAS基因的第2、3号外显子和BRAF基因的第15号外显子的基因突变情况。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述根据所述PCR产物，确定所述待测样本的KRAS基因的第2、3号外显子和BRAF基因的第15号外显子的基因突变情况，包括：

电泳检测所述PCR产物，获得所述PCR产物的扩增片段大小；

当所述PCR产物的扩增片段大小正确时，对所述PCR产物进行序列测定，获得所述待测样本的KRAS基因的第2、3号外显子和BRAF基因的第15号外显子的基因突变情况。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述多重PCR反应体系还包括：DNA聚合酶、所述DNA聚合酶对应的PCR缓冲液、4种脱氧核糖核苷三磷酸dNTP的混合物和超纯水；

其中，DNA聚合酶的用量为0.5-5U，每种dNTP的终浓度为50-500μM，所述引物组中每条引物的终浓度为20-300nM。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，

所述DNA聚合酶，包括：Taq聚合酶、KOD FX、Phusion或Platinum聚合酶。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，

所述PCR反应体系的反应条件包括：92-95℃，预变性1～8min；92-98℃，变性5～20s；52～68℃，退火10～60s；68～72℃，延伸0.2～5min将变性、退火、延伸循环25～40次，65～74℃，终延伸0～30min。