[发明专利]用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组及其应用方法

说明书

本发明提供了用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组及其应用方法，该引物组，包括下述至少一个用于检测KRAS基因的引物对和用于检测BRAF基因的引物对：用于检测KRAS基因第2号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；用于检测KRAS基因第3号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；用于检测BRAF基因第15号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。使得基因检测通量提高。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，特别涉及用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组及其应用方法。

背景技术

研究表明，西妥昔单抗(爱必妥)、帕尼单抗靶向作用于表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)的药物，吉非替尼(易瑞沙)和厄洛替尼(特罗凯)等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIS)分子靶向药物，仅对未发生KRAS基因突变的患者有效率较高，而对已发生KRAS基因突变的患者则几乎没有反应。而《NCCN结直肠癌临床实践指南》指出，在决定是否用抗EGFR单克隆抗体(西妥昔单抗和帕尼单抗)治疗前，应先检测肿瘤组织基因突变，对KRAS野生型患者增加BRAF基因突变检测。由于BRAF是KRAS下游的信号传导分子，若BRAF突变则抗EGFR治疗对KRAS野生型患者无效，而对KRAS和BRAF均为野生型的患者效果最好。因此，在进行结直肠癌、肺癌的靶向治疗前进行BRAF基因突变的检测对于判别治疗药物的敏感性有一定的指导意义。

目前，可针对KRAS基因的第2号外显子(包含第12、13位密码子)、3号外显子(包含第61号密码子)和BRAF基因的15号外显子(包含第600位密码子)分别设计聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)检测试验，以进行基因突变情况的检测。

但是，由于每一个PCR反应只针对KRAS基因或者BRAF基因的一个外显子，故基因突变的检测通量低。

发明内容

本发明实施例提供了用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组及其应用方法，能够提高基因突变的检测通量。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

多重PCR是在常规PCR基础上发展的一种新型扩增技术，可在一个反应体系中加入两对及以上的引物，同时扩增多个核酸片段。多重PCR在微生物、遗传病、肿瘤药物基因组学有着重要的应用。基于此，针对KRAS基因的第2号外显子(包含第12、13位密码子)、3号外显子(包含第61号密码子)和BRAF基因的15号外显子(包含第600位密码子)来设计特异性扩增的上下游引物。

第一方面，本发明提供了用于检测KRAS基因和BRAF基因突变的引物组，包括：包括下述至少一个用于检测KRAS基因的引物对和用于检测BRAF基因的引物对：

用于检测KRAS基因第2号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

用于检测KRAS基因第3号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

用于检测BRAF基因第15号外显子的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

通过上述至少一个引物对组成的引物组，可以相对最大程度提高KRAS基因的第2、3号外显子和BRAF基因的第15号外显子突变的检测通量。