[发明专利]3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置及其制备方法有效
申请号: | 202010370097.0 | 申请日: | 2020-04-30 |
公开(公告)号: | CN111638363B | 公开(公告)日: | 2022-02-18 |
发明(设计)人: | 杨小军;李欣 | 申请(专利权)人: | 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N33/66 | 分类号: | G01N33/66;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/543 |
代理公司: | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人: | 魏征骥 |
地址: | 136200 吉林省辽*** | 国省代码: | 吉林;22 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 脱氧 果糖 快速 定量 荧光 检测 装置 及其 制备 方法 | ||
1.一种3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法,所述3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置结构是样品垫(1)、免疫荧光抗体玻璃纤维膜(2)、免疫硝酸纤维素膜(3)、吸收垫(4)分别粘贴在塑料板(5),所述免疫硝酸纤维素膜(3)的两端分别与吸收垫(4)、免疫荧光抗体玻璃纤维膜(2)搭接,所述免疫荧光抗体玻璃纤维膜(2)的另一端与样品垫(1)搭接;所述免疫硝酸纤维素膜(3)上设置检测线(T)和质控线(C),所述的检测线(T)上固相有3-脱氧果糖-载体蛋白;所述的质控线(C)上喷点羊抗兔IgG多克隆抗体,其特征在于:包括下列步骤:
(a)免疫荧光微球的制备,取100ul 固含为 1%的微球悬浮液,用超纯水稀释10倍,即1000ul,加入到EP 管中,取40ul 的 N-羟基琥珀酰亚胺液NHS加入微球悬浮液中混匀,然后接着将40ul 的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐液EDC加入微球悬浮液中混匀,常温下反应 0.5 小时,将反应后的悬浮液用超声波超声,使管壁上的微球重新悬浮在水溶液中,然后将微球悬浮液离心,离心条件 10000r/min、20min,倒掉上清液,加入 1ml超纯水,然后用超声波超声分散均匀;
(b)活化的免疫荧光微球交联标记3-脱氧果糖抗体,取1ml 活化后的免疫荧光微球悬浮液,超声分散均匀,然后边搅拌边滴加抗体,加入抗体后,反应30s-120s后,再到超声波上超声20-40秒,然后再反应1小时,加牛血清白蛋白BSA进行封闭1小时,将封闭好的微球进行离心,速度为 10000r/min,15min,将免疫荧光微球缓冲液加入到离心后的微球中,使微球分散均匀,待用;
(c)采用缓冲液稀释步骤(b)的免疫荧光微球交联标记抗体获得免疫荧光抗体溶液,用免疫荧光抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫,制得免疫荧光抗体玻璃纤维膜;
(d)将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理后,喷点与油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合的载体蛋白-3-脱氧果糖作为检测线,喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线,制得免疫硝酸纤维素膜;
(e)将预处理的样品垫、步骤(c)制备的免疫荧光抗体玻璃纤维膜、步骤(d)制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上,切裁制得检测试剂条,最后将检测试剂条装入塑料外壳。
2.根据权利要求 1 所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法,其特征在于:所述的检测线(T)上固相有3-脱氧果糖-载体蛋白,该3-脱氧果糖-载体蛋白是指:卵清蛋白OVA、或牛血清白蛋白BSA、或血蓝蛋白KLH。
3.根据权利要求 1 所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法,其特征在于:步骤(b)所述的缓冲液由 Tris-HCL 液、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白 BSA组成,pH 值8.5,其中 Tris-Hcl 浓度为 0.02mol/L,蔗糖浓度为 5~20%,海藻糖浓度为 1~5%,牛血清白蛋白 BSA 浓度为 0.5~1% 。
4.根据权利要求 1 所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法,其特征在于:步骤(d)所述的将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理是:用聚乙二醇丙三醇处理液浸泡硝酸纤维素膜1 h,并慢速振荡摇晃,取出后用蒸馏水清洗3遍,最后在真空干燥箱中干燥;
步骤(d)所述的油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合载体蛋白-3脱氧果糖是:以油酸修饰的 ZnS作为载体,取1mL3脱氧果糖-载体蛋白溶液,搅拌1小时后,分别以12000 rpm,8500rpm和7000 rpm离心10分钟收集,去离子水各洗2遍。
5.根据权利要求1或4所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法,其特征在于:步骤(d)所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇稀释到浓度为0.5%组成,经0.22μm滤膜过滤,备用。
6.根据权利要求1或4所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法,其特征在于:步骤(d)所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇和多聚赖氨酸SIGMA,150KD~300KD混合组成,其中聚乙二醇丙三醇浓度为0.5%,多聚赖氨酸浓度为0.5%,经0.22μm滤膜过滤,备用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于吉林省格瑞斯特生物技术有限公司,未经吉林省格瑞斯特生物技术有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010370097.0/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。