[发明专利]3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置及其制备方法

权利要求书

1.一种3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法，所述3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置结构是样品垫（1）、免疫荧光抗体玻璃纤维膜（2）、免疫硝酸纤维素膜（3）、吸收垫（4）分别粘贴在塑料板（5），所述免疫硝酸纤维素膜（3）的两端分别与吸收垫（4）、免疫荧光抗体玻璃纤维膜（2）搭接，所述免疫荧光抗体玻璃纤维膜（2）的另一端与样品垫（1）搭接；所述免疫硝酸纤维素膜（3）上设置检测线（T）和质控线（C），所述的检测线（T）上固相有3-脱氧果糖-载体蛋白；所述的质控线（C）上喷点羊抗兔IgG多克隆抗体，其特征在于：包括下列步骤：

（a）免疫荧光微球的制备，取100ul 固含为 1%的微球悬浮液，用超纯水稀释10倍,即1000ul，加入到EP 管中，取40ul 的 N-羟基琥珀酰亚胺液NHS加入微球悬浮液中混匀，然后接着将40ul 的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐液EDC加入微球悬浮液中混匀，常温下反应 0.5 小时，将反应后的悬浮液用超声波超声，使管壁上的微球重新悬浮在水溶液中，然后将微球悬浮液离心，离心条件 10000r/min、20min，倒掉上清液，加入 1ml超纯水，然后用超声波超声分散均匀；

（b）活化的免疫荧光微球交联标记3-脱氧果糖抗体，取1ml 活化后的免疫荧光微球悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，反应30s-120s后，再到超声波上超声20-40秒，然后再反应1小时，加牛血清白蛋白BSA进行封闭1小时，将封闭好的微球进行离心，速度为 10000r/min,15min，将免疫荧光微球缓冲液加入到离心后的微球中，使微球分散均匀，待用；

（c）采用缓冲液稀释步骤（b）的免疫荧光微球交联标记抗体获得免疫荧光抗体溶液，用免疫荧光抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫荧光抗体玻璃纤维膜；

（d）将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理后，喷点与油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合的载体蛋白-3-脱氧果糖作为检测线，喷点羊抗兔IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；

（e）将预处理的样品垫、步骤（c）制备的免疫荧光抗体玻璃纤维膜、步骤（d）制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。

2.根据权利要求 1 所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法，其特征在于：所述的检测线（T）上固相有3-脱氧果糖-载体蛋白，该3-脱氧果糖-载体蛋白是指：卵清蛋白OVA、或牛血清白蛋白BSA、或血蓝蛋白KLH。

3.根据权利要求 1 所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（b）所述的缓冲液由 Tris-HCL 液、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白 BSA组成，pH 值8.5，其中 Tris-Hcl 浓度为 0.02mol/L，蔗糖浓度为 5~20%，海藻糖浓度为 1~5%，牛血清白蛋白 BSA 浓度为 0.5~1% 。

4.根据权利要求 1 所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理是：用聚乙二醇丙三醇处理液浸泡硝酸纤维素膜1 h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥；

步骤（d）所述的油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合载体蛋白-3脱氧果糖是：以油酸修饰的 ZnS作为载体，取1mL3脱氧果糖-载体蛋白溶液，搅拌1小时后，分别以12000 rpm，8500rpm和7000 rpm离心10分钟收集，去离子水各洗2遍。

5.根据权利要求1或4所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇稀释到浓度为0.5%组成，经0.22μm滤膜过滤，备用。

6.根据权利要求1或4所述的3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇和多聚赖氨酸SIGMA,150KD～300KD混合组成，其中聚乙二醇丙三醇浓度为0.5%，多聚赖氨酸浓度为0.5%，经0.22μm滤膜过滤，备用。