[发明专利]3-脱氧果糖快速定量荧光检测装置及其制备方法

说明书

本发明涉及一种3‑脱氧果糖快速定量荧光检测装置及其制备方法，属于医疗检测领域。由固相有3‑脱氧果糖‑载体蛋白和羊抗鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维素膜、吸附有免疫荧光微球标记3‑脱氧果糖抗体的玻璃纤维、样品垫、吸水纸等其它辅料粘贴制成。采用聚乙二醇丙三醇处理液对硝酸纤维素膜进行预处理，将载体蛋白‑3‑脱氧果糖先与油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合再吸附到硝酸纤维素膜上，并配制合适的缓冲液和样品垫处理液，在保证免疫荧光微球释放完全的基础上，有效的提高了反应的灵敏度，同样的阈值下，还可降低免疫荧光微球的用量，节约成本，又没有增加生产操作的复杂度。检测试纸灵敏度高、特异性强、操作简便省时、实用性强。

技术领域

本发明涉及医疗检测设备领域，特别涉及3-脱氧果糖快速定量检测装置及其制备方法，利用免疫荧光层析技术以及竞争法原理定量检测全血、血清、血浆或尿液标本中3-脱氧果糖含量的检测装置及其制备方法，可实现3-脱氧果糖的快速检测，且灵敏度高、特异性强。

背景技术

我国高血糖发生率逐年升高，糖尿病患者群体逐年扩大；糖尿病并发症，比如糖尿病心血管病、糖尿病足、糖尿病肾病、糖尿病眼病等，给人类造成了极大损伤和经济负担；如何在这些并发症来临之前我们就可以及早发现，已经成为医学界关注的热点和研究的热点；本发明涉及的产品就是针对糖尿病引发的相关并发症进行早期预警和诊断的临床诊断工具。

大量文献报道，糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)在血管疾病的发生发展中起着重要作用。AGE的形成又称为非酶糖基化反应，是指体内蛋白质自发地与葡萄糖或其他还原单糖反应生成的稳定的共价化合物。该过程主要分为三个步骤:首先是游离氨基与糖分子中的醛基反应形成Schiff碱，然后Schiff碱发生重排产生可逆的早期糖基化产物———Amadori产物，最后Amadori产物再发生复杂的分子重排，形成不可逆的糖基化终末产物。

最近大量证据表明，体内糖基化终末产物的不断累积与其心血管疾病的发生和发展关系密切。糖基化终末产物可使蛋白质分子结构和功能性质发生改变，如糖基化终末产物可以使结缔组织的胶原蛋白发生交联而使血管和韧带变硬；使血清蛋白沉积于基底膜而增厚；糖基化终末产物修饰蛋白可被内皮细胞识别和摄取，使血管通透性增加，内皮细胞表面的抗凝物凝血调节蛋白减少，促血凝的组织因子合成增加；内皮细胞损害之后，一氧化氮产生减少而灭活增加，使血管舒张反应性降低，血管收缩而影响组织器官的血液输送。终末期肾衰患者血液中的糖基化终末产物浓度增加，糖基化终末产物修饰β2微球蛋白增加，糖基化终末产物交联戊糖苷增加，均可加重组织损毁。大量研究表明，糖基化终末产物在动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、尿毒症和血管性勃起功能障碍、阿尔茨海默病等多种疾病和衰老的发生发展过程中起着重要的作用；可通过及时、动态进行检测AGE，进行相关疾病的预警、筛查和诊断。糖基化终末产物(AGE)形成过程为：首先，生物大分子(蛋白质)末端的还原性氨基与葡萄糖分子中的醛基进行缩合，从而形成可逆的席夫碱,反应迅速且高度可逆。形成的席夫碱的数量主要取决于葡萄糖的浓度,当葡萄糖被清除、浓度下降时,席夫碱将在数分钟内发生逆转。也就是说，这个阶段，血糖浓度越高的人形成的席夫碱就越多；几天之后,不稳定的席夫碱逐渐发生Amadori重排，然后就形成相对稳定的醛胺类产物,此过程发生得较为缓慢,但是因为Amadori产物能在蛋白质上积聚,并在几周之内达到平衡，这个时候，葡萄糖对蛋白质的损害就已经显现出来了，这俩过程的产物统称为早期糖基化产物；Amadori产物再经过一系列重新排列、脱水、缩合、交联产生不可逆转的高糖化终末产物，让很多蛋白质丧失掉原有的功能。

因此糖基化终末产物(AGE)的检测显然成为医学界非常重要的事情、也是医学工作者研究的热点，但不论采用什么技术方法去直接检测糖基化终末产物(AGE)，结果都不理想，无法达到临床预防和诊断的目的，直接原因就是糖基化终末产物(AGE)的结构不明且呈多样化；研究表明糖基化终末产物(AGE)形成过程中，有个中间产物3-脱氧葡糖松，它和糖基化终末产物(AGE)的浓度是一致的；而它在体内又被还原成无活性的3-脱氧果糖；所以测定人血浆和尿液中的3-脱氧果糖值就可以直接反应出体内糖基化终末产物(AGE)值。