[发明专利]一种新型褐藻胶特异性结合蛋白及其制备与应用

权利要求书

1.一种褐藻胶特异性结合蛋白，其特征在于：为褐藻胶特异性结合蛋白 AusG_Wf，其氨基酸序列为 SEQ ID NO. 1。

2.编码权利要求 1 中 AusG_Wf 的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQID NO. 2 所示及可翻译出 SEQ ID NO. 1 的所有序列。

3.一种权利要求 1 中所述的 AusG_Wf 的制备方法，其特征在于：基于 AusG_Wf基因序列，通过克隆表达的方法实现 AusG_Wf 的制备，其中表达宿主为大肠杆菌、毕赤酵母、枯草芽孢杆菌中的一种。

4.一种权利要求 1 中所述的 AusG_Wf 与荧光蛋白融合制备的方法，其特征在于：表达载体为 pRSET_EmGFP 大肠绿色荧光表达质粒、pRSETB_mCherry 大肠红色荧光 表达质粒中的一种，此时得到与荧光蛋白融合表达的 AusG_Wf。

5.权利要求 1 中所述的 AusG_Wf 在褐藻胶定性、半定量、可视化观察中的应用。

6.一种采用权利要求 1 中所述的 AusG_Wf 对褐藻胶进行定性或半定量检测的方法，其特征在于：基于 AusG_Wf，结合微阵列技术实现褐藻胶的定性或半定量检测。

7.如权利要求 6 所述的对褐藻胶进行定性或半定量检测的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取待测液 1μL 至反应介质上，室温干燥；

（2）用含有封闭剂的缓冲液封闭反应介质；

（3）根据反应介质面积的大小，将一定量 AusG_Wf 滴加至反应介质上，孵育后用水冲洗；

（4）利用步骤（2）中缓冲液稀释对重组表达的 AusG_Wf 具有结合能力的抗体，取一定量滴加至反应介质上，孵育后用水冲洗，根据反应介质面积的大小，滴加一定量显色试剂，显色；

（5）化学发光仪信号检测。

8.如权利要求 6 所述的对褐藻胶进行定性或半定量检测的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取待测液 1μL 至反应介质上，室温干燥；

（2）用含有封闭剂的缓冲液封闭反应介质；

（3）根据反应介质面积的大小，将一定量荧光标记的或与荧光蛋白融合表达的 AusG_Wf 滴加至反应介质上，孵育后用水冲洗；

（4）荧光成像仪信号检测。

9.如权利要求7或8所述的对褐藻胶进行定性或半定量检测的方法，其特征在于：用于定性检测时，步骤（1）中的待测液为待测样品；用于半定量检测时，步骤（1）除待测液外，还需分别取 1μL 具有浓度梯度的褐藻胶标准溶液于反应介质上，信号检测后利用图像处理软件将已知褐藻胶浓度的荧光信号转化为灰度值，以灰度值为纵坐 标，褐藻胶浓度值为横坐标建立标准曲线。

10.一种采用权利要求 1 中所述的 AusG_Wf 对褐藻胶进行特异性可视化观察的方法，其特征在于：染色时在样品中滴加荧光标记的 AusG_Wf，然后利用显微镜观察采 集图像，实现褐藻胶的特异性可视化观察。