[发明专利]一种新型褐藻胶特异性结合蛋白及其制备与应用

说明书

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种新型褐藻胶特异性结合蛋白及其制备与应用。AusG_Wf对褐藻胶具有特异性结合能力，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。本发明中的AusG_Wf制备程序简便、快速、成本低、且能够大批量制备，解决了此前褐藻胶特异性结合蛋白无法实现高效获取的问题。另外，本发明还提供了基于AusG_Wf在褐藻胶定性、半定量、可视化观察中的方法及应用实例。AusG_Wf是一种研究褐藻胶的理想工具，具有可观的开发应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种新型褐藻胶特异性结合蛋白及其制备与应用。

背景技术

褐藻胶是一类存在于海带、马尾藻、巨藻等褐藻细胞壁中的天然阴离子多糖，是由α-L 古洛糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸通过1,4糖苷键连接而成的线性高分子聚合物。褐藻胶是一种重要的海洋多糖，因其良好的凝胶性、乳化性、增稠性等物理化学特性，在食品、化工、医药等领域得到了广泛的应用。现已证明褐藻胶具有促进肠胃蠕动、神经保护、降血脂、抗凝血、抗病毒等一系列生理调节功能，在功能食品开发方面亦具有巨大潜力。

碳水化合物特异性结合蛋白是一类可以特异性识别、结合特定结构碳水化合物的蛋白。基于特异性结合的特点，碳水化合物结合蛋白可用于多糖及寡糖的亲和纯化、酶的固定化、以及特定结构碳水化合物的定性、半定量与特异性可视化观察，是碳水化合物的研究与开发的重要工具。当前国内外关于褐藻胶特异性结合蛋白的报道稀少，仅有Torode等人于2016 年报道了一组可特异性识别褐藻胶的抗体BAM6及BAM8-BAM11；但抗体获取的流程繁琐且成本高昂，而且目前抗体BAM6及BAM8-BAM11的编码基因序列未知，无法对其进行克隆表达以实现大批量制备。因此，制备低成本且能够高效获取的褐藻胶特异性结合蛋白具有意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是目前少见关于褐藻胶特异性结合蛋白的研究，且没有高效获取褐藻胶特异性结合蛋白的有效途径，不利于对褐藻胶的深入研究与开发。

为解决上述问题，本发明从海洋细菌Wenyingzhuangia fucanilytica CZ1127^T中挖掘出一条编码褐藻胶特异性结合蛋白的基因序列AusG_Wf。基于其明确的基因序列，本发明通过克隆表达的方法制备出褐藻胶特异性结合蛋白AusG_Wf。与传统褐藻胶特异性抗体的获取相比具有简便、快速、成本低、且能够大批量制备的优点。另外，本发明还提供了基于AusG_Wf 的褐藻胶定性、半定量、可视化观察的方法及应用实例，展现出AusG_Wf的良好应用潜力。

进一步的，所述褐藻胶特异性结合蛋白为褐藻胶特异性结合蛋白AusG_Wf，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

SEQ ID NO.1：

EDLPEAGSKPDNTPPSSSFSAEEQSGDYLTYLFTNTSDSATDYEWDFGDAASGADNTS TEKDPSHTFSGEGTYTVTLVASDKLGVESTFSSTVEVVEPDAPSVFVPTILEAGFEDGGLAG GTGDGRDSWRISGGKIFGITSSPVRTGSQGAKFDAGDPRVAYQELTVTPNADYIVSIYYTMK TDPAGGALRLAVLGEAISNASEAEAAIIASVSGTDQTSASDYVQMTLEFNSGNRSTIAIWIDS NNITEARVDDVTIIAKPE

上述褐藻胶特异性结合蛋白AusG_Wf含有一个CBM16家族的碳水化合物结合结构域。 AusG_Wf能够结合褐藻胶，且对与褐藻胶具有类似结构的多糖(果胶、硫酸软骨素、透明质酸、肝素)及褐藻来源的多糖(海带淀粉、岩藻聚糖)不具有结合能力(图1所示)。本发明中的AusG_Wf底物特异性强、制备简便且成本低，同时能够大批量获取，在褐藻胶的定性、半定量、可视化观察等研究中可发挥重要作用。

上述褐藻胶特异性结合蛋白AusG_Wf所对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。