[发明专利]一种用于检测尿液BK病毒的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种用于检测尿液BK病毒的试剂盒及方法，其中包括2×Taq Mix、BK病毒扩增引物、ddH₂O；所述BK病毒扩增引物为：F：GGGCAGCGCACGATGTTTT；R：AGCTGCCCCTGGACACTCT，检测方法按照先后顺序包括以下步骤：步骤一：待测样本的获取；步骤二：PCR反应液的配置；步骤三：PCR扩增；步骤四：目的条带回收；步骤五：将样本回收的DNA进行纯化，然后连接载体送去测序；步骤六：与BK病毒的序列进行比对，如果一致，则指示该样品中存在BK病毒，如不一致或者样本管中无与阳性对照相同大小的条带，则指示该样品中不存在BK病毒。该用于检测尿液BK病毒的试剂盒和方法能够快速检测出尿液中是否带有BK病毒，而且准确度高，周期短，采用特有的BK引物，使得检测特异性高。

技术领域

本发明属于生物病毒检测技术领域，具体涉及一种用于检测尿液BK病毒的试剂盒和方法。

背景技术

人多瘤病毒BK型(Human polymavirus type BK)(BK病毒)是具有大约5300bp的环状双链DNA基因组的无包被病毒。在1971年，BK病毒在从肾移植受体的尿中分离后，被首次承认为多瘤病毒家族的成员。随后的研究表明，全世界成人的血清阳性率为80％以上。一般地，BK病毒的原发感染在儿童时期通过呼吸道发生，随后病毒潜伏在泌尿生殖道中。尿中病毒的无症状再活化和间歇性脱落在具有免疫能力的人中自然发生，但是在那些细胞免疫改变的人如孕妇、正在接收化疗的癌症患者、感染HIV-1的个体和肾或其它同种异体移植的受体中频率更高。BK病毒感染引起的明显临床疾病很少，并且与免疫抑制的程度明显相关。

该病毒典型地在原发性感染后潜伏在尿路上皮细胞和肾小管上皮细胞中。据信高达80％的人群含有潜伏形式的该病毒。对于免疫抑制和/或免疫低下的个体，BK病毒感染的症状明显更严重，例如在器官移植的设定中。在这种情况下，临床表现可能包括肾功能不全以及尿液中存在肾小管细胞和炎性细胞。具体地，在免疫抑制或免疫力受损的设定中，病毒再激活并复制，从肾小管细胞溶解和病毒尿症开始引发一系列事件。然后，病毒在间质中扩增并进入管周毛细血管，引起病毒血症并最终侵入同种异体移植物，导致各种肾小管间质病变和BK肾病(BKVN)。BK病毒显著促进了移植物丧失的可能性的增加。BK病毒是一种常见的移植后机会性病毒感染，在移植后第一年影响大概15％的肾移植接受者。如不解决，BK肾病将进展为同种异体移植失败。

现有用于检测BK病毒的方法大都检测周期长，速度慢，而且检测准确度不高，所以我们急需能够实现快速、有效且准确检测BK病毒的产品，以用于BK病毒载量的检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测尿液BK病毒的试剂盒和方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于检测尿液BK病毒的试剂盒，其中包括2×Taq Mix、BK病毒扩增引物、ddH₂O；

所述BK病毒扩增引物为：

F：GGGCAGCGCACGATGTTTT；

R：AGCTGCCCCTGGACACTCT。

优选的，所述2×Taq Mix包括TaqDNA聚合酶、dNTPs、标准Taq酶反应缓冲液、酶稳定剂和溴酚蓝染料。

一种用于检测尿液BK病毒的方法，按照先后顺序包括以下步骤：

步骤一：待测样本的获取：从待测尿液中提取BK病毒的DNA，获得待测样本；

步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照管、样本管和阴性对照管，总反应体系为50μL，其中包括2×Taq Mix 25-35μL、BK病毒扩增引物F 2μL、BK病毒扩增引物R 2μL、样本DNA 2μL、ddH₂O补至50μL；