[发明专利]一种用于检测多种细菌耐药基因的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测多种细菌耐药基因的试剂盒，其中包括引物组，用于检测甲氧西林葡萄球菌基因的引物如下：F：5’‑GCAATTCACATAAACCTCATATGTTC‑3’；R：5’‑ACCTCATATGTTCTGATACATTCA‑3’；用于检测青霉素肺炎链球菌基因的引物如下：F：5’‑GACAAATGTAGACCAAGAAGCTCAAG‑3’；R：5’‑GTACGAATTCTCCATTTCTGTAGAGG‑3’；用于检测万古霉素肠球菌基因的引物如下：F：5’^‑AAGCTCAGCAATTTGTATGG‑3’；R：5’^‑CGCTATTGACTTTTTCACAC‑3’；Taq酶、dNTP、MgCl₂和PCR反应缓冲液。该一种用于检测多种细菌耐药基因的试剂盒可以无需培养直接检测感染患者血浆中的可培养菌或不可培养细菌的耐药基因；可对超微量核酸样本实现定量检测功能，检测灵敏度可低至10拷贝以下，灵敏度高，该反应可以在恒温条件下进行，操作简便，不需要昂贵的仪器设备，成本较低。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测多种细菌耐药基因的试剂盒。

背景技术

全国细菌耐药监测网的统计显示，在耐药细菌中，革兰氏阴性菌占70％左右，其中以大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌为多，且多重耐药情况严重；革兰氏阳性菌占30％左右，其中，葡萄球菌属占到2/3，而金黄色葡萄球菌几乎占葡萄球菌属的一半，肠球菌属占革兰氏阳性菌的1/4左右，并以粪肠球菌和屎肠球菌为主。细菌耐药性(Antimicrobial Resistance))又称抗药性，系指细菌对于抗菌药物作用的耐受性，耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。耐药性根据其发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性。自然界中的病原体，如细菌的某一株也可存在天然耐药性，当长期应用抗生素时，占多数的敏感菌株不断被杀灭，耐药菌株就大量繁殖，代替敏感菌株，而使细菌对该种药物的耐药率不断升高。

几十年来，随着感染性疾病的增多，伴随广谱抗生素的广泛或不合理使用，细菌的耐药情况变得日益严重，甚至产生细菌的多重耐药。感染性疾病难以控制、易复发、术后感染率高、昂贵抗菌药物使用量增加等后果日益凸显。因此对这些病原菌快速检测确定其耐药性，不仅在指导临床合理选用抗菌药有重要价值，也为预防和控制耐药细菌感染和传播提供依据，为耐药疫情监控和监测检验提供了可靠的技术手段，具有重要的现实意义。

细菌之所以具有耐药性，从本质上看是因为携带各类耐药基因，且耐药基因可以在不同菌种间进行水平迁移，使得耐药性问题急剧扩散。耐药基因的检测技术主要包括普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、多重PCR、实时荧光定量PCR和基因芯片等技术。耐药基因的检测工作量巨大，因为一方面，大量证据表明数量庞大的细菌可以是耐药基因的供体、受体和中间体；而另一方面，耐药基因种类繁多，比如目前已发现的四环素耐药基因就多达40多种。

古霉素属于糖肽类大分子抗生素，药力较强，在其他抗生素对病菌无效时会被使用。主要用于葡萄球菌(包括抗青霉素和抗新青霉素株)和肠球菌引起的肠道感染，如心内膜炎、败血症、伪膜性肠炎等。万古霉素曾被认为是抗感染的“最后底线”，但随着万古霉素的广泛使用，各种抗万古霉素的超级细菌已经被陆续分离出来，其中最常见的就是抗万古霉素肠球菌。这也为临床诊断和治疗提出了新的要求，即需要一种快速有效的方法来检测病原菌是否对万古霉素抗受，否则极有可能造成误诊，耽误病情。现有的细菌的检测方法有菌培养法、显微镜检法、血清学实验检测、普通PCR扩增技术等。其中，菌培养法分离周期长，过程繁琐，不利于早期的快速诊断；显微镜检法虽然快速方便，但容易漏检，阳性率不高，且部分菌种间不易区分；血清学实验检测，对于轻度和局部感染的检测不够灵敏。所以我们需要一款新型的用于检测多种细菌耐药基因的试剂盒来满足人们的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测多种细菌耐药基因的试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。