[发明专利]一种快速检测血浆中他达拉非浓度的方法

说明书

本发明公开了一种快速检测血浆中他达拉非浓度的方法，包括如下步骤：（1）血浆样品前处理：向离心管中加入血浆样品、内标溶液和乙腈，涡流振荡，离心，取出上清转移至96孔板中，进行LC‑MS/MS分析；（2）色谱分离：以含0.1%甲酸和5 mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，以含0.1%甲酸的乙腈作为流动相B，流动相A:流动相B=55：45；等度洗脱，洗脱时间2.2min；（3）质谱检测。本发明检测方法具备操作简单、灵敏度高，分析时间短等特点，定量限为4.00 ng/mL，检出限可达6.67 pg。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种快速检测血浆中他达拉非浓度的方法。

背景技术

他达拉非为磷酸二酯酶5抑制剂，临床上用于治疗勃起功能障碍。目前检测血液中他达拉非的技术主要应用于药物体内筛查和药物临床药动学或等效性研究。检测技术主要为液相色谱-串联质谱联用法（LC-MS/MS）。该技术主要步骤包括样品前处理、色谱分离以及质谱检测。现有技术中前处理通常使用固相萃取法及液-液提取法，步骤较为复杂、成本高、耗时长。临床研究中通常需要检测大量的血液样本。复杂的前处理方法降低了检测的效率。另外，现有技术还存在血浆用量大、检测时间长、检测精度低等缺点。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种快速检测血浆中他达拉非浓度的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速检测血浆中他达拉非浓度的方法，包括如下步骤：

（1）血浆样品前处理：

向离心管中加入血浆样品、内标溶液和乙腈，涡流振荡，离心，取出上清转移至96孔板中，进行LC-MS/MS分析；

（2）色谱分离：

以含0.1%甲酸和5 mM醋酸铵的水溶液作为流动相A，以含0.1%甲酸的乙腈作为流动相B，流动相A:流动相B=55：45；等度洗脱，洗脱时间2.2min；

（3）质谱检测：

电喷雾电离源；电压为5500 V；离子源温度为550℃；Curtain Gas和CID压力分别为35和8 psi；扫描模式为+MRM；监测离子反应分别为：他达拉非，m/z 390.5→268.3；他达拉非-d3，m/z 393.2→271.2；CE分别为16和18 eV；DP分别为60 V和56 V；扫描时间为200 ms。

优选的，步骤（1）中，所述内标溶液为50 ng/mL的他达拉非-d3溶液。

优选的，步骤（1）中，所述血浆样品、内标溶液和乙腈加入的体积比为1：1：4。

优选的，步骤（1）中，涡流振荡时间10min，离心转速3900 rpm，离心时间10 min。

优选的，步骤（1）中，取出上清150 µL转移至96孔板中，取2.00 µL进行LC-MS/MS分析。

上述前处理条件中，共加样、涡旋、离心、转移上清4个步骤。与现有固相萃取或液-液提取技术相比，操作大大简化，1小时内可完成96个样本的前处理。

优选的，步骤（2）中，所述色谱分离还包括：色谱柱：XDB-C18，1.8 μm，4.6*50 mm；进样量：2.0 μL；柱温：40℃；自动进样器温度为4℃，流动相的流速为：0.7 mL/min。

上述色谱条件中选择的色谱柱为XDB-C18柱，待测物在具备较好的色谱保留及色谱峰形，柱长为50 mm适合快速检测方法，粒径为1.8 μm，可以使色谱峰形更尖锐进而提升灵敏度；等度色谱洗脱模式适合快速检测，色谱分析时间仅为2.2 min，是目前最快速的检测方法。

本发明的有益效果：