[发明专利]一种核酸检测微流控芯片及其应用

说明书

本发明提供了一种核酸检测微流控芯片及其应用，属于核酸检测技术领域，所述核酸检测微流控芯片，包括连通的RT‑RPA反应区域和试纸检测区域；所述RT‑RPA反应区域包括依次连通的核酸样本加样区、第一缓冲液池、第二缓冲液池、RT‑RPA反应液池、等温扩增池、扩增产物池；所述试纸检测区域包括试纸缓冲液池和试纸储存池。本发明中所述核酸检测微流控芯片可以将多步反应包括核酸等温扩增和试纸检测集成在一个密闭的系统内，一步完成，实现核酸的自动化、可视化检测。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，尤其涉及一种核酸检测微流控芯片及其应用。

背景技术

微流控芯片可以将多步生物学反应集成整合成一条流水线，将复杂的多步反应在一个密闭的系统内自动化完成。由于核酸检测一般需要扩增放大信号，所以核酸的试纸检测一直存在技术难题，等温扩增技术是近年来新出现的一种简易核酸扩增技术，其反应过程始终维持在恒定的温度下，通过添加不同温度活性的酶和特异性引物来达到快速扩增核酸的目的。

与PCR相比，等温扩增对仪器的要求大大简化甚至不需要仪器，反应时间也大大缩短，能更好满足快速简便检测的需求。目前，等温扩增比较常用的技术有环介导等温扩增(LAMP)和重组酶聚合酶扩增(RPA)。环介导等温扩增通常在60℃～65℃进行，反应时间为40分钟左右，结果通过浊度指数或SYBR Green荧光来判定；另一种方法，重组酶聚合酶扩增(RPA)一般在37～42℃进行扩增，测定耗时短(3～15分钟)、灵敏度高，体系组分稳定易保存，读取结果多样化，可以在便携式设备上进行操作。最近，逆转录重组酶聚合酶等温扩增技术(RT-RPA)已用于鉴定核酸靶标，它既不需要高温，也不需要周期控制，因此RPA等温扩增是PCR很好的替代方法。

由于RT-RPA实验反应过程中，需要先将几个成分提前混合，再在一个等温环境里扩增，因此步骤繁琐，操作困难，需要专业人士才能进行实验。而且，在核酸的试纸检测中，RT-RPA扩增产物还需和试纸检测缓冲液混合，再滴加在试纸条的样品垫处，再进行最终的结果观察，整个过程步骤较多，需要实验室专业人员操作完成，不利于现场使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种核酸检测微流控芯片及其应用；所述核酸检测微流控芯片可以将多步反应包括核酸等温扩增和试纸检测集成在一个密闭的系统内，一步完成，实现核酸的自动化、可视化检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种核酸检测微流控芯片，包括连通的RT-RPA反应区域和试纸检测区域；

所述RT-RPA反应区域包括依次连通的核酸样本加样区、第一缓冲液池、第二缓冲液池、RT-RPA反应液池、等温扩增池、扩增产物池；

所述试纸检测区域包括试纸缓冲液池和试纸储存池。

优选的，所述RT-RPA反应区域和试纸检测区域通过微管道连通。

优选的，所述微管道的宽度为180～220μm，所述微管道的深度为80～120μm。

优选的，所述第一缓冲液池中添加第一缓冲液；所述第一缓冲液以水为溶剂，包括以下浓度的组分：肌型肌酸肌酶80～120ng/μL、磷酸肌酸45～55mmol/L、ATP 2～4mmol/L、聚乙二醇20M 4～6wt％、二硫苏糖醇1～3mmol/L、三羟甲基氨基甲烷45～55mmol/L、特异性引物1μmol/L和乙酸钾80～120mmol/L。

优选的，所述第二缓冲液池中添加第二缓冲液；所述第二缓冲液为10～20mmol/L的乙酸镁水溶液。