[发明专利]一种修饰信号多肽ComX及其原核表达与纯化方法

说明书

本发明涉及一种修饰信号多肽ComX及其原核表达与纯化方法。所述多肽ComX的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述编码多肽ComX的comX基因序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还提供一种含有comX基因的重组载体，同时提供一种ComX原核表达菌株及其制备方法，并提供了一种所述ComX原核表达菌株表达所得修饰信号多肽ComX的纯化方法。本发明采用的大肠杆菌表达系统，同时表达了修饰酶ComQ及目标信号多肽ComX，获得了人工合成困难的修饰信号多肽ComX，具有表达效率高、成本低、易操作等特点，所获得的ComX成熟肽方便纯化，且纯度高、产率高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种修饰信号多肽ComX及其原核表达与纯化方法。

背景技术

细菌的群体感应(Quorum Sensing，QS)，是细菌根据种群密度大小进行细胞内或细胞间相互交流、协调群体行为的一种重要机制。在枯草芽胞杆菌中，ComQXPA是群体感应系统中主要的信号途径，调控细菌感受态细胞的形成、芽孢的产生、生物膜的形成以及抗生素的产生等。ComX信号分子前体经ComQ修饰后转变为有活性的10氨基酸短肽，成熟多肽ComX通过磷酸化形式将信号传递给ComP，ComP又激活调控因子ComA的转录与表达，进而通过结合surfactin启动子区来调控其合成。但是现有技术中，修饰信号多肽ComX人工合成困难，因此亟需一种高效简单的合成技术出现。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于一种修饰信号多肽ComX及其原核表达与纯化方法。枯草芽孢杆菌群体感应信号分子ComX的基因编码序列comX由165bp碱基组成，编码54个氨基酸组成的ComX信号前体，经过ComQ酶的修饰与切割后成为有活性10氨基酸信号肽ComX。具体原核表达制备ComX成熟多肽时，包括：PCR扩增、酶切、与双基因表达质粒pETDuet1连接构建重组质粒pETDuet1-ComQComX、测序、转化、诱导表达等步骤。本方法所采用的大肠杆菌表达系统，同时表达了修饰酶ComQ及目标信号多肽ComX，获得了人工合成困难的修饰信号多肽ComX，具有表达效率高、成本低、易操作等特点，所获得的ComX成熟多肽方便纯化，且纯度高、产率高。

本发明所采用的技术方案为：

一种用于修饰信号多肽ComX，其特征在于，所述多肽ComX的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示；所述编码多肽ComX的comX基因序列如SEQ ID NO：2所示。

一种含有编码所述修饰信号多肽ComX的comX基因的重组载体。

一种含有上述重组载体的ComX原核表达菌株。

一种制备所述ComX原核表达菌株的方法，包含以下步骤：

(1)枯草芽胞杆菌NCD-2基因组，之后依次进行PCR扩增、电泳回收、酶切并纯化，得到comQ基因片段和comX基因片段；

(2)将所述comQ基因片段和所述comX基因片段依次克隆至pETDuet1双表达载体上，并进行PCR验证，且测序验证正确即得到重组质粒pETDuet1-ComQComX；

(3)将所述重组质粒pETDuet1-ComQComX转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中，得到所述ComX原核表达菌株。

进一步的，步骤(1)中所述的PCR扩增和步骤(2)中所述的PCR验证使用的引物均包括扩增comX基因的引物和扩增comQ基因的引物；所述comX基因的引物为ComX-F和ComX-R，基因序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；扩增comQ基因的引物为ComQ-F和ComQ-R，基因序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；