[发明专利]一种核酸-抗体双重检测新型冠状病毒的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种核酸-抗体双重检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，包括核酸检测体系和抗体检测试纸条；

所述核酸检测体系包括重组酶聚合酶扩增检测体系和核酸检测试纸条；所述重组酶聚合酶扩增检测体系包括扩增新型冠状病毒特异性基因的引物组；所述引物组中的上游引物包括第一延伸序列，所述引物组的下游引物包括第二延伸序列；

所述核酸检测试纸条的结合区吸附金包硅球纳米粒子Si0₂@Au修饰的检测探针；所述检测探针与所述第一延伸序列互补配对；

所述核酸检测试纸条的检测区包括检测线和质控线；所述检测线上喷涂捕获探针，所述质控线上喷涂质控探针；所述捕获探针与第二延伸序列互补配对；所述质控探针与检测探针互补配对；

所述抗体检测试纸条的检测区包括第一检测线、第二检测线和质控线；所述第一检测线喷涂新型冠状病毒特异性N蛋白与S蛋白的混合物；所述第二检测线喷涂新型冠状病毒特异性N蛋白与S蛋白的混合物；所述质控线喷涂二抗。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒特异性基因包括编码ORF1ab的基因和编码核壳蛋白N的基因。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组包括上游引物Orf1ab F和下游引物Orf1ab R；所述上游引物Orf1ab F和下游引物Orf1ab R的核苷酸序列如SEQ IDNo.1和SEQ ID No.2所示；

所述引物组还包括上游引物核壳蛋白F和下游引物核壳蛋白R；所述上游引物核壳蛋白F和下游引物核壳蛋白R的核苷酸序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示；

所述检测探针包括第一检测探针和第二检测探针；所述第一检测探针和第二检测探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.8所示；

所述检测线包括第一检测线和第二检测线；所述第一检测线和第二检测线上分别喷涂第一捕获探针和第二捕获探针；所述第一捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述第二捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；所述质控线上喷涂第一质控探针和第二质控探针；所述第一质控探针的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述第二质控探针的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体检测试纸条的检测区的第一检测线和第二检测线上喷涂的新型冠状病毒特异性N蛋白与S蛋白的混合物的浓度为(0.8～1.2)mg/mL；所述N蛋白与S蛋白的质量比为1:1。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒特异性N蛋白与S蛋白的混合物的喷涂量为0.8～1.2μL/cm。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述二抗的浓度为(0.8～1.2)mg/mL，所述二抗的喷涂量为0.8～1.2μL/cm。

7.权利要求1～6任意一项所述的试剂盒的制备方法，包括核酸检测试纸条的制备和抗体检测试纸条的制备；

所述核酸检测试纸条的制备包括以下步骤：将金包硅球纳米粒子Si0₂@Au修饰的检测探针吸附于结合垫，将捕获探针喷涂于检测区的检测线上、质控探针喷涂于检测区的质控线上；然后将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接在底板上获得核酸检测试纸条；

所述抗体检测试纸条的制备包括以下步骤：将金标抗体吸附于结合垫上，将新型冠状病毒特异性N蛋白与S蛋白的混合物喷涂于硝酸纤维素膜的第一检测线和第二检测线上，并将二抗喷涂于质控线上；然后将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接在底板上获得抗体检测试纸条。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，金包硅球纳米粒子Si0₂@Au修饰的检测探针的制备方法包括以下步骤：将金包硅球纳米粒子Si0₂@Au溶液依次与dATP、SDS、NaCl和检测探针混合后偶合获得。